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癫癎是常见的慢性神经系统疾病之一,是脑部神经元异常放电而引起的突发、反复、自限的脑功能紊乱。约60%患者于儿童期起病,儿童癫癎中,70%～80%患者经系统、正规抗癫癎药治疗可获得长期缓解,仍有10%～30%患儿的发作不能得到有效控制,成为难治性癫癎(refractory epilepsy,RE)也称耐药性癫癎。癫癎反复发作,不仅给患病儿童造成躯体损害,也导致一系列心理及社会问题。因此,对癫癎特别是难治性癫癎的临床与基础研究十分重要。自国际抗癫癎联盟新的癫癎分类标准制定以来,目前国内对难治性癫癎大样本量的研究不多。基础研究方面,难治性癫癎的发病机制是多年来研究的难点与热点,多药转运体及以单核昔酸多态性为切入点的候选基因研究是难治性癫癎分子遗传学研究的重要策略。而多药转运体的重要成员P糖蛋白(Pgp)的过度表达被认为是癫癎难治的机制之一,而Pgp的表达和外排功能又受到编码基因MDR1基因多态性的影响。因此本研究通过临床及分子流行病学方法,研究儿童难治性癫癎的临床特征及MDR1基因单核苷酸多态性在儿童癫癎患者中的分布及与癫癎耐药的关系。第一部分儿童难治性癫癎的临床研究目的分析儿童难治性癫癎的临床特点,探讨儿童难治性癫癎的诊断问题。方法在我院癫癎中心收集登记的400例癫癎儿童(新诊断癫癎167例,回顾性诊断233例),采用回顾性及前瞻性分析方法进行随访,对其中难治性癫癎(应用过＞2种抗癫癎药,平均发作仍≥1次/月至少6月)患者的临床特征如发病年龄、性别、发作特点、发作分类、脑电生理、神经影像学、神经系统发育、病因及预后等进行分析,并采用多元回归分析寻找癫癎难治的相关因素。采用2001年国际抗癫癎联盟(ILAE)分类方法对癫癎及癫癎综合征进行诊断与分类。结果本研究83例(20.8%)患儿诊断为难治性癫癎(20例为新诊断癫癎,占新诊断癫癎的12.0%),平均随访1.17年(±0.83),中位随访时间0.96年,33例(39.8%)难治性癫癎患儿随访＞1年。结果显示:(1)平均发病年龄2.13岁(中位数0.93岁),1岁之前发病者51.8%;性别:男55例(66.3%),女28例(33.7%)。(2)发作特点:频繁发作(平均每周/每天发作)61例(73.5%),丛集性发作者59例(71.1%),出现多种癫癎发作形式43例(51.8%)。(3)癫癎综合征:33例可归于某种癫癎综合征,以West及Lennox-Gastuat综合征最为常见,分别为13例、11例。(4)其他研究:伴发精神运动发育迟缓74例(89.8%),影像学异常改变37例(44.6%),脑电图背景活动变慢26例(74.3%,26/35)。(5)病因分析:症状性癫癎64例(77.1%),19例(22.9%)为隐源性。(6)用药与预后:应用3种药物的比例达42.9%,应用4种药物者达7.2%。83例难治性癫癎患者用药有效40例(48.2%),显效6例(7.2%);无效37例(45.1%),其中25例(67.6%)有不同程度的减轻。(7)对年龄、性别、病因、丛集发作、药物数量等进行多元回归分析,丛集性发作与难治呈显著相关(OR=4.51,95%CI1.84-11.04,p=0.001)。结论本研究约20%的癫癎患儿为难治性癫癎,具有如下特点:发病年龄早、发作频繁、癫癎综合征尤其癫癎脑病多见,伴发或继发精神运动发育迟缓(严重倒退往往提示遗传代谢性疾病或神经变性病),脑电图背景活动异常、神经影像学异常改变、症状性癫癎多、应用多种抗癫癎药物疗效差,但抗癫癎治疗仍有意义。丛集性发作为难治性癫癎的危险因素。第二部分MDR1 C3435T多态性与儿童难治性癫癎关系目的本研究观察多药耐药基因MDR1 exon26 C3435T单核苷酸多态性(SNP)在癫癎患者中的分布特点,并探讨其与癫癎耐药的相关性。方法以DNA抽提试剂盒Kits方法成功提取132例患者及62例健康儿童外周血DNA,以PCR扩增、DNA测序法检测MDR1基因exon26 C3435T的单核苷酸多态性。根据对抗癫癎药物的反应将儿童癫癎患者分为难治组、控制组,并用健康儿童作为正常对照组,应用病例对照研究,分析基因多态性在癫癎患者中的分布特点及其与癫癎耐药的相关性。结果入组194例研究对象MDR1C3435T存在CC、CT和TT三种基因型,总人群中MDR1CC、CT和TT基因型分布频率分别为38.1%,45.9%和16.0%,癫癎患者中MDR1CC、CT和TT基因型分布频率分别为37.0%,45.0%和16.0%,两者比较基因型分布无差异(p=0.97)。MDR1C3435T多态性方面:70例耐药组患者和62例控制组患者中,耐药组与控制组的CC基因型、TT基因型频率比较差异无统计学意义,耐药组与正常组的CC基因型、TT基因型频率比较差异无统计学意义。耐药与控制组两组病例的等位基因频率表较亦未发现统计学差异(CvsT,p=0.33)。多因素Logistic回归分析显示,MDR1C3435T的CC基因型与癫癎耐药无相关性。结论癫癎患者中的MDR1C3435T的CC、CT和TT基因型频率分布与总人群均无显著差异。MDR1C3435T的CC基因型、C等位基因与癫癎耐药无相关性。