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本研究旨在筛选溴甲烷土壤消毒的有效替代品,并探讨快速有效的分子生物学方法定性定量研究土传病原真菌,综合评价土壤消毒的药效,为土壤消毒防治土传病害提供更为科学的依据。通过常规的病原菌分离培养方法分离重要的土传病原真菌,采用改进的冷冻研磨CTAB法提取基因组DNA,对真菌核糖体基因的内转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）进行克隆测序,设计特异性引物,并进行引物特异性及灵敏性检验。根据所设计的特异性引物,采用实时荧光定量PCR方法对硫酰氟处理后土样中病原真菌进行定性定量研究,并结合病原菌传统培养计数的方法,综合评价硫酰氟土壤消毒对土传病原真菌的控制效果。通过本研究,得到如下结果: （1）采用不同剂量的硫酰氟室内土壤熏蒸,结果表明硫酰氟用量在5.44×10-2g/L～43.52×10-2g/L对土壤中尖镰刀菌有很好的防效,与本室所做的硫酰氟田间药效试验结果相一致,说明硫酰氟是很有潜力的土壤熏蒸剂。 （2）从采集的保护地病土与典型病组织中成功分离到辣椒疫霉,番茄晚疫病菌,尖镰刀菌,瓜果腐霉,链格孢。并收集培养了寄生疫霉,苎麻疫霉,棉尖镰孢,燕麦镰孢,串珠镰孢,禾谷镰孢,腐皮镰孢,大丽轮枝菌,番茄灰霉等菌株。 （3）对冷冻研磨CTAB法进行改进后,成功提取多种真菌的基因组DNA。并对腐皮镰孢,分离的镰刀菌,辣椒疫霉,番茄晚疫病菌,大丽轮枝菌,瓜果腐霉的ITS区进行克隆测序,结果显示其长度分别为544bp,544bp,793bp,884bp,541bp,866bp。经序列比对,结果显示腐皮镰刀菌和分离的镰刀菌均与尖镰刀菌的一个专化型Fusarium oxysporum f.sp.meloni同源性高达99%以上,推测它们的分类地位可能都应归属于Fusarium oxysporum f.sp.meloni.其余菌株序列比对,结果显示其种属名均与GenBank中报道的一致。 （4）对分离的镰刀菌,辣椒疫霉,大丽轮枝菌三种重要土传病原真菌设计了特异性引物,kful/kfu2,ljyml/ljym2,dllzl/dlLz2,并进行引物的特异性及灵敏性检验,结果表明退火温度均为65℃时,三对引物均具有良好的特异性和灵敏性。 （5）以不同剂量硫酰氟处理后的土样为样本,根据所设计的特异性引物,采用荧光定量PCR方法对土样中病原真菌进行定性定量研究。结果表明,可准确定量不同处理土样中尖镰刀菌的rDNA拷贝数,显示硫酰氟对该菌有很好的控制效果,并明确了尖镰刀菌是满城草莓病害一个重要致病菌,初步形成了土传病原真菌快速有效的分子检测技术。 实时荧光定量PCR技术可以对DNA模板准确定量,灵敏度高、特异性和可靠性强,将其应用到农药药效研究领域,通过对土传病原真菌进行定性定量研究,从新的角度来评价土壤消毒的药效,为农药药效研究提供了新的研究途径。