从健康烟草根际分离到669株根际芽孢杆菌，通过平板对峙培养、代谢产物活性检测，获得9株抑制烟草赤星病菌(Alternaria alternata)活性较强的菌株，其菌体及代谢粗提物产生的抑菌圈均在10 mm以上；离体防效和田间小区防治试验表明，B6、B75菌株的含菌发酵液和代谢粗提物的离体防效分别为75.6％、76.9％和62.5％、64.7％，小区防效分别为70.3％、75.8％和60.3％、64.4％。代谢粗提物的抑菌作用试验发现，B75菌株的代谢粗提物在一定浓度范围能抑制赤星病菌孢子萌发、菌丝生长与产孢。采用生理生化、Biolog和16S rDNA序列测定，对筛选的一株烟草赤星病菌拮抗细菌B75菌株进行了鉴定，生理生化鉴定显示该菌株与Bacillus subtilis极为相似；Biolog鉴定显示其为B．subtilis；进一步对该菌株作16S rDNA序列测定与分析，表明其与己报道的B．subtilis具有99.8％的同源性，二者在所构建的系统发育树上处于同一个分支。因此确定B75菌株属于枯草芽孢杆菌(B．subtilis)。以NB培养液对B75菌株进行培养试验，结果表明，B75在对数生长的中期开始产生抗菌物质，在生长的衰退期前存在一个产生抗菌物质的高峰期；在25～50℃、pH4.0～8.5范围内均可产生抗菌物质，其中30℃和pH6.0的培养条件下最适。不同的装液量试验结果表明，B75菌株在装液量为100ml／500ml三角瓶时是菌体生长及产生抗菌物质的最适宜量。不同的碳／氮源试验结果表明，甘露醇、酵母膏最有利于B75菌株菌体生长，且产生的抗菌物质抑菌活性较强。枯草芽孢杆菌B75菌株发酵粗提液的抗菌物质可被饱和度为40％的硫酸铵完全沉淀。对该沉淀的部分理化性质研究发现，121℃处理30min，活性保持不变；在pH 4-8的范围内，随pH的增大，溶解度增大，但pH 8室温下存放24h，活性明显下降；用胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K处理，活性无明显降低。该沉淀用磷酸缓冲液溶解后，经Sephadex G25脱盐、Source 15 FLPC(fast protein liquidchromatography)、反相C18 HPLC (high performance liquid chromatography)多次分离、纯化，得到1个活性峰。取活性峰在Q-TOF2(electrospray ionization quadrupoletime-of-flight mass spectrometry)检测时发现有2个峰，分子量为分别为1463.81D、1477.82D。经Q-TOF2和ApexQ FF-MS(Fourier-transform ion cyclotron resonancemass spectrometry)分析，鉴定为芬枯草杆菌素(Fengycin)。采用浓盐酸、硫酸铵沉淀枯草芽孢杆菌B75的无菌发酵液中的抗菌物质，磷酸缓冲液(50 mmol／L，pH 6.8)、甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯8种溶剂提取菌体抗菌物质，并进行生物活性检测和HPLC分析。结果表明硫酸铵沉淀物的活性比浓盐酸强；甲醇、乙醇、乙腈、丙酮提取物具有抑菌活性，其抗菌活性显著低于浓盐酸、硫酸铵沉淀物；同一RP-HPLC条件下，硫酸铵沉淀的杂质比浓盐酸多，浓盐酸与硫酸铵沉淀物的活性峰无差异，甲醇、乙醇、乙腈、丙酮提取物的活性峰可完全重叠，比较发现浓盐酸与硫酸铵沉淀物的活性峰明显不同于菌体提取物。这些结果说明，枯草芽孢杆菌B75液体发酵的无菌滤液、菌体中均存在抗菌物质，且存在两者之中的抗菌物质明显不同：无菌滤液抗菌物质可溶于磷酸缓冲液，而菌体中的则不溶；两者在同一RP-HPLC条件下，出峰时间差异明显。