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背景和目的： 重症肌无力是一种典型CD4+T细胞依赖性的自身免疫性疾病。胸腺被认为是重症肌无力致病相关的重要器官，临床上常用的治疗方法是胸腺切除术，MG患者胸腺切除后显示症状明显好转，AchR抗体在血清中的表达水平也明显降低。AchR抗体的诱导和持续不断的产生都依赖于T细胞，胸腺是T细胞的分化成熟和清除自身反应性T细胞的关键器官。胸腺异常是MG患者是最常见的病理现象。约65％的MG患者发现胸腺淋巴滤泡性增生，胸腺瘤中也存在的约10％MG患者中。MG胸腺增生的主要特征是大量的T细胞聚集在血管周围，而其他MG胸腺真正的上皮是萎缩的，反映出的是不成熟的双阳性细胞的百分比下降。增生的胸腺中另一个重要的病理特征是生发中心的形成，生发中心中B细胞数量增加，产生大量抗AchR抗体，参与MG的发生。只是仍然不清楚MG胸腺异常与T细胞发育和分化的关系，还不清楚MG胸腺异常对T细胞发育和分化的影响。 人脐血干细胞是从足月顺产的新生儿脐静脉中采集到，与成人外周血不同的是人脐带血中含有丰富的原始干细胞，具有非常强的向非造血系统分化的能力，所以脐血干细胞移植已广泛应用于多种疾病的治疗。有研究报道脐带血干细胞对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的影响，结果显示脐血干细胞参与调节免疫系统，为脐血干细胞治疗EAMG带来了新的希望。 重症联合免疫缺陷小鼠（SCID小鼠）由于无法进行VDJ重组，它们体内不能发育出成熟T和B淋巴细胞。有报告报道移植的胸腺小块组织在SCID小鼠的肾被膜内，增生繁殖能持久的产生抗AchR抗体。因此，我们采用SCID小鼠模型，把MG患者胸腺移植到SCID小鼠肾被膜下，研究移植胸腺对人脐带血干细胞分化的影响，进一步揭示T细胞与重症肌无力发病机制的关系。 材料与方法： 1.胸腺组织移植SCID小鼠肾被膜48只重症联合免疫缺陷小鼠（SCID小鼠）随机分成三组，每组16只。分别是MG胸腺组织移植组，正常胸腺组织移植组和人CD34+脐血细胞组。将来自MG胸腺组织移植于MG胸腺组织移植组SCID小鼠左肾被膜下。正常胸腺组织植入正常胸腺组织移植组SCID小鼠。人CD34+脐血细胞组为对照组不用做胸腺组织移植。SPF级分笼喂养，每日观察小鼠状况，并记录。 2.静脉注射CD34+脐血干细胞取自健康产妇断脐后的脐带血分别用Ficoll-泛影葡胺溶液分离，免疫磁珠分选成CD34+脐血干细胞。用计数板计数，流式细胞仪检测细胞的纯度后备用。在胸腺组织移植两个星期后，给三组小鼠静脉注射分选的CD34+脐血干细胞(3-5×106/mouse)，每组分别有10只继续喂养至60天。 3.异种肿瘤细胞移植每组剩余6只SCID小鼠在注射CD34+脐血干细胞后30天，将培养的低分化胃癌BGC823细胞注射在小鼠的右肩部皮下(2×106/mouse)，每3天用卡尺测定量肿瘤的大小，并记录。 4.组织学和免疫组织化学注射CD34+脐血干细胞后60天的10只SCID小鼠，麻醉后眼底静脉取血0.5ml。处死小鼠，取出肾脏和部分脾脏，将组织固定于10％中性福尔马林中，石蜡包埋，切片4μm，分别进行HE染色和免疫组化染色，光学显微镜镜下观察染色情况。 5.流式细胞仪检测上述小鼠静脉血及部分新鲜脾脏组织分别处理成细胞悬液后。分别加入异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗人CD4，CD3，CD19和CD161;藻红蛋白(PE)标记的抗人CD8，CD25和CD56，以及同型对照漂洗，孵育，离心，上FACScalibur流式细胞仪进行检测。实验结果用FACScalibur流式细胞仪专用软件分析。 6.统计学分析采用SPSS10.0统计软件进行统计分析，对计数资料进行x2检验，两组间有显著差异进行t检验。 结果： 1.SCID小鼠胸腺移植组织HE染色显示胸腺移植组织与周围肾组织之间的有明显的分界。胸腺皮质和髓质结构均在肾被膜移植区域存活，并有大量胸腺细胞组成。免疫组织化学染色分析表明，CD3和HLA-DR阳性细胞大量存在于MG胸腺移植区域，CD25阳性细胞在胸腺移植区域中弥散分布。 2.SCID小鼠脾脏接收人胸腺移植组织和CD34+脐血干细胞后的免疫组织免疫组织化学染色显示小鼠脾脏内人源T细胞来源于小鼠体内移植后的胸腺组织和CD34+脐血干细胞。在SCID小鼠脾脏内重新增殖的人源T细胞与人的MG-胸腺移植物的分布相似，都SCID小鼠被支配。人源CD3+T细胞主要位于周围动脉的周围淋巴鞘，并分散在脾白髓的周围。 3.对人胃癌BGC823细胞系异种移植肿瘤在移植人CD34+脐血细胞的SCID小鼠进行15天观察，发现的异种移植肿瘤大小增加明显。相反，移植正常胸腺同时注射CD34+脐血干细胞的SCID小鼠，对异种移植瘤的生长有显著抑制作用。同样移植了MG-胸腺和CD34+脐血干细胞的SCID小鼠形成的异种移植瘤的生长，也被抑制。 4.CD34+脐血干细胞移植的SCID小鼠结合胸腺移植能显著改善人源T细胞再增殖。胸腺和CD34+脐血干细胞联合移植对人源T细胞持续增殖，主要包括CD3+，CD4+，CD8+，CD4+CD25+，CD3+CD56+细胞。与MG胸腺/CD34+脐血细胞联合移植的SCID小鼠的CD3+CD56+和CD161+T细胞相比有显著地升高，同时CD4+和CD4+CD25+T细胞与正常胸腺/CD34+脐血细胞联合移植的SCID小鼠显著减少(P＜0.05)。两组小鼠之间的CD3+和CD8+T细胞增殖水平无显著差异(P＞0.05)。人胸腺移植对CD19+B细胞的增殖无影响(P＞0.05)。 小结： 1.正常人胸腺、MG患者胸腺移植，能为SCID小鼠提供T细胞发育的场所，并可用来探讨胸腺对T细胞分化的影响。 2.MG胸腺-SCID小鼠产生CD4+CD25+T细胞比正常胸腺移植的SCID小鼠的低，致CD4+CD25+T细胞在MG胸腺和外围组织缺失，可能是重症肌无力发生的原因之一。