论文部分内容阅读
背景:由于缺乏可靠、灵敏的早期诊断生物标志物,多数胰腺癌(pancreatic cancer,PC)患者诊断时就处于不可切除状态而失去手术时机,这被认为是导致胰腺癌患者高死亡率的重要原因之一。目前越来越多的研究表明外泌体micro RNA(exosomal micro RNA,exmiR)对于恶性肿瘤的诊断及预后具有重要作用。相关文献及我们之前的研究表明,miR-21、miR-10b、miR-212-3p及miR-18a-5p在肿瘤中高表达,对于肿瘤的诊断及预后具有一定价值。目的:(1)分析比较exmiR-21、exmiR-10b、exmiR-212-3p及exmiR-18a-5p在不同分期胰腺癌组、健康对照组及胰腺良性疾病组血浆中的含量;(2)分析比较各exmiR单独及联合应用时在胰腺癌诊断中的价值,从中筛选出能用于胰腺癌诊断的exmiR。(3)分析比较exmiR表达水平与胰腺癌预后的关系,从中筛选出能够预测胰腺癌预后的exmiR。方法:(1)我们通过应用脂质体纳米颗粒(tethered cationic lipoplex nanoparticle,TCLN)芯片技术检测了不同分期的36名胰腺癌患者、36名健康个体以及8名腺良性疾病患者的血浆exmiR-21,exmiR-10b、exmiR-212-3p及exmiR-18a-5p的含量。比较exmiR在各组中的表达是否存在差异。(2)通过计算受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线下面积(area under the curve,AUC)分析比较各exmiR单独及联合应用时在胰腺癌诊断中的价值。(3)单因素Cox回归分析用于筛选影响胰腺癌预后的潜在临床因素及exmiR,多因素Cox回归用于筛选影响胰腺癌预后的独立危险因素。结果:(1)与健康人相比,exmiR-21的含量在胰腺癌患者(TNMⅠ-Ⅳ)中显著升高(p<0.0001)。TNMⅠ期、Ⅱ期的胰腺癌患者以及Ⅲ期、Ⅳ期的患者相较于健康人exmiR-21的含量也显著升高(p=0.0115;p=0.0003)。胰腺癌组血浆exmiR-10b的含量相较于健康人组显著升高(p=0.0025)。血浆exmiR-18a-5p在胰腺癌组的含量相较于健康人组显著升高(p=0.0002)。血浆exmiR-212-3p在健康人组、胰腺良性疾病组及胰腺癌组中的含量无明显统计学差异。(2)ROC分析显示,血浆exmiR-21在胰腺癌组和健康对照组中AUC为0.82(p<0.0001),其对应的敏感度为69.4%,特异度100%。在胰腺癌组和胰腺良性疾病组中其AUC为0.75(p=0.0370),敏感度80.5%,特异度75%。而在健康对照组与胰腺良性疾病组中,AUC为0.54(p=0.7150)。ExmiR-18a-5p及exmiR-10b在胰腺癌组与健康对照组中的AUC分别为0.79(p<0.0001)和0.75(p=0.0003),它们对应的敏感度和特异度分别为63.9%,100%和55.6%,86.1%。ExmiR-212-3p不能识别胰腺癌组和健康对照组(AUC=0.56,p=0.3499),但是其可识别胰腺癌组和胰腺良性疾病组(AUC=0.73,p=0.0446;敏感度52.8%,特异度87.5%)、胰腺良性疾病组和健康对照组(AUC=0.73,p=0.0446;敏感度75%,特异度77.8%)。将受试者进一步分为胰腺癌组和非胰腺癌组,并再次行ROC曲线分析评估exmiRs对于胰腺癌的诊断识别能力。结果显示,exmiR-21、exmiR-18a-5p和exmiR-10b均可识别胰腺癌组患者和非胰腺癌组患者(AUC=0.81,p<0.0001,敏感度69.4%,特异度95.5%;AUC=0.81,p<0.0001,敏感度55.6%,特异度81.8%;AUC=0.72,p=0.0007,敏感度63.9%,特异度97.7%)。ExmiR-21联合exmiR-18a-5p进行ROC分析,得到其AUC=0.84(p<0.0001),敏感度75%,特异度95.5%。ExmiR-21联合exmiR-10b,exmiR-10b联合exmiR-18a-5p分别进行ROC分析,其AUC分别为0.84(p<0.0001)和0.80(p<0.0001)。其敏感度分别为75%和63.9%,特异度分别为93.2%和97.7%。三种exmiRs联合ROC分析显示AUC=0.84(p<0.0001),其敏感度75%,特异度95.5%。(3)单因素Cox回归分析提示年龄大于等于60岁(p=0.031)、TNM分期为Ⅰ期和Ⅱ期(p=0.037)、接受手术(p=0.031)、exmiR-212-3p含量低(p=0.020)为胰腺癌患者潜在的有利预后因素。多因素Cox回归分析提示TNM分期(p=0.013)和exmiR-212-3p(p=0.011)是胰腺癌患者的独立预后因素,且TNM分期为Ⅰ期和Ⅱ期和exmiR-212-3p低含量与更好的胰腺癌预后有关。结论:(1)我们的研究结果显示,胰腺癌患者血浆中exmiR-21、exmiR-10b及exmiR-18a-5p含量升高。ROC分析显示,在候选的4种exmiRs中,exmiR-21作为单一诊断标志物准确度及敏感度最高,是较有潜力的胰腺癌早期诊断生物标志物。ExmiR-21联合exmiR-18a-5p可提高诊断效能,并提高胰腺癌诊断敏感度。(2)胰腺癌分期、血浆exmiR-212-3p含量是影响胰腺癌患者预后的独立危险因素,且TNM分期为Ⅰ期和Ⅱ期、低表达水平的exmiR-212-3p与更好的胰腺癌预后有关。