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目的:探究在高糖环境下不同浓度的网膜素-1(Omentin-1)对结肠癌干细胞表面标志物表达的影响,初步了解Omentin-1对结肠癌干细胞中抑癌相关micro RNA达的改变方法:使用课题组前期通过间接免疫磁珠分选获得的CD133+结肠癌干细胞作为研究对象,并使用细胞免疫化学染色法鉴定CD133+结肠癌干细胞。根据不同研究目的进行相应分组:(1)将结肠癌干细胞分为6组:Z0组(不作任何处理)、Z1组(1ug/m L网膜素-1)、Z2组(2ug/m L网膜素-1),G0组(5.0g/m L葡萄糖)、G1组(1ug/m L网膜素-1+5.0g/m L葡萄糖)、G2组(2ug/m L网膜素-1+5.0g/m L葡萄糖),干预24h后,分别使用q PCR法以及Western blot法检测各组干细胞表面标志物(CD133、CD44、ALDH1)m RNA水平以及蛋白水平的表达(2)将结肠癌干细胞分为3组:分为Control组(不作任何处理)、Omentin 1组(1ug/m L Omentin-1)、Omentin 2组(2ug/m L Omentin-1),干预24h后,使用q PCR法测定抑癌相关mi RNA(mi R-126、mi R-34a、mi R-143、mi R-145、mi R-342)表达的变化。结果:1.结肠癌干细胞的培养过程中,可观察到结肠癌干细胞呈悬浮生长,并逐渐聚集成干细胞球。细胞免疫化学染色法观察到细胞表面CD133的阳性表达。2.结肠癌干细胞表面标志物表达改变(1)CD133 m RNA的表达:与Z0组相比,Z1、Z2组CD133 m RNA表达显著减少(P<0.05),Z1和Z2组间无明显差异(P>0.05);与Z0组相比,G0组CD133m RNA表达显著增加(P<0.05);与G0组相比较,G1、G2组CD133 m RNA表达显著减少(P<0.05),G1与G2组间CD133 m RNA表达无明显差异(P>0.05)(2)CD44m RNA表达:与Z0组、Z1组相比较,Z2组CD44 m RNA表达显著增加(P<0.05),而Z0组与Z1组间CD44 m RNA表达无明显差异(P>0.05);与G0组、G1组相比较,G2组CD44 m RNA表达显著增加(P<0.05),而G0与G1组间以及G2与Z2组间均无明显差异(P>0.05)。(3)ALDH1 m RNA表达:Z0、Z1、Z2组间以及G0、G1、G2组间ALDH1m RNA表达均无明显差异(P>0.05)。(4)CD133蛋白的表达:与Z0相比,Z2组CD133蛋白表达显著减少(P<0.05),但Z1组则无明显差异(P>0.05);与G0组相比,G1与G2组CD133蛋白表达均显著减少(P<0.05),而G1与G2组间无明显差异(P>0.05);G2和Z2组间CD133蛋白表达无明显差异(P>0.05)。(5)CD44、ALDH1蛋白水平表达:Z0、Z1、Z2组间以及G0、G1、G2组间蛋白表达均无明显差异(P>0.05)。3.抑癌相关mi RNA(mi R-126、mi R-34a、mi R-143、mi R-145、mi R-342)表达:与Control组以及Omentin 1组相比较,Omentin 2组中mi RNA126、mi RNA 34a、mi RNA 145以及mi RNA 342-5P表达均显著增加(P<0.05),而上述mi RNA的表达在Control组与Omentin1组间均无显著差异(P>0.05);此外,mi RNA342-3P以及mi RNA 143的表达在Control组、Omentin 1组、Omentin 2组三组间均无明显差异(P>0.05)。结论:1.高糖环境可上调结肠癌干细胞表面标志物CD133 m RNA以及蛋白的表达2.网膜素-1可下调高糖环境下结肠癌干细胞表面标志物CD133 m RNA以及蛋白的表达,并可上调CD44 m RNA的表达。3.网膜素-1可以促进抑癌相关的mi RNA126、mi RNA 145、mi RNA 34a和mi RNA342-5P的表达。