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胆管癌是一种极度恶性预后极差的恶性肿瘤,在肝胆系恶性肿瘤中发病率居第二位,且近年来有上升趋势；胆管癌目前采取以手术切除为主,辅助化疗、放疗及光动力疗法的综合治疗手段,其治疗效果仍然令人失望。寻找新的胆管癌治疗靶点对提高胆管癌预后具有重要的理论及实际意义。胆管癌生长的任何过程都是以能量代谢为基础,其中葡萄糖是其主要的供能物质。葡萄糖代谢供应能量主要通过两种途径,包括以糖酵解生成乳酸方式提供ATP及线粒体氧化磷酸化方式提供ATP。研究表明,肿瘤细胞倾向于以糖酵解方式提供能量,而氧化磷酸化供能途径受到抑制。这和正常组织细胞供能方式截然相反(正常细胞以氧化磷酸化为主要提供能量的方式),显然利用这种代谢差异,作用于肿瘤细胞的糖酵解途径扰乱其能量代谢过程,可能会对肿瘤细胞具有杀伤作用,这为肿瘤治疗提供了新的治疗策略。乳酸脱氢酶-A (lactate dehydrogenase, LDHA)是糖酵解供应能量的关键酶,主要催化糖酵解途径的终末产物丙酮酸转化为乳酸,通过底物水平磷酸化产生ATP,因此抑制LDHA表达可能会对胆管癌细胞的各种生物学行为造成影响,而起到杀灭肿瘤的作用。既往研究发现LDHA在非小细胞肺癌、胃癌、结肠癌及乳腺癌均有不同程度的过度表达,且是预后较差的生物指标,下调LDHA会显著抑制其肿瘤进展及转移等生物学特性,然而其对胆管癌细胞的生物学意义尚不清楚。为此,本研究利用RNA干扰技术沉默胆管癌细胞系Hucctl LDHA基因表达,分析其对胆管癌细胞增殖及凋亡的影响,探讨以LDHA作为治疗靶点的可能性。本实验首先挑选出高表达LDHA的胆管癌细胞系,并构建3条LDHA短发夹RNA质粒,脂质体法转染至高表达LDHA胆管癌细胞,利用实时荧光定量PCR (RT-PCR)法及Western blot法鉴定各干扰质粒的干扰效果,筛选出最有效的干扰质粒；将干扰效率最高的质粒转染胆管癌细胞,利用MTT法检测干扰组较阴性对照组细胞增殖的变化,行AnnexinV/PI双染色法检测干扰组较阴性对照组细胞凋亡率的改变,利用荧光探针DCFH-DA检测干扰组较阴性对照组活性氧自由基(ROS)的改变情况。本实验得到如下结果：1.我们发现胆管癌细胞系Hucct-1及QBC939较正常胆管上皮细胞系HiBEpiC高表达LDHA:2.设计并构建三条pGPU6/GFP/Neo-LDHA-siRNA质粒,短发夹RNA质粒-3(siLDH-A3)的干扰效率最高,RT-PCR法检测ldh-a mRNA表达量仅为阴性对照组的53%±11%(p<0.05)；Western blot法检测LDH-A蛋白的表达显著下降,为阴性对照组的29%士2%(p<0.05)；3.脂质体法转染干扰质粒-3到Hucct-1细胞系,MTT法检测显示转干扰组胆管癌细胞系(RNAi)较阴性对照组(NC)增殖减慢,96小时时间点两组差异具有统计学意义(0.95±0.04Vs0.73±0.04)(p<0.05)；96小时时间点干扰组(RNAi)胆管癌细胞较阴性对照组(NC)细胞凋亡率显著增加,分别为(20.47±3.35)%及(9.0±1.08)%,差异有统计学意义(p<0.05)。4.下调LDHA表达提高胆管癌细胞内ROS水平；利用荧光探针DCFH-DA检测两组细胞内的总ROS水平,RNAi组细胞平均荧光强度约是对照组的4倍。结论：体外实验证实下调LDHA表达,可以抑制胆管癌细胞Hucct1的增殖并促进其凋亡增加,LDHA可作为胆管癌细胞的潜在的治疗靶点。