论文部分内容阅读
[目 的]运用高通量测序技术及荧光定量PCR对胎膜早破孕妇的胎盘、胎膜的菌群丰度及妊娠结局进行研究。[方 法]选取于昆明医科大学第一附属医院产科规律产检且无任何并发症的孕妇为研究对象,未足月胎膜早破(PPROM)孕妇5例,足月胎膜早破(TPROM)组孕妇25例,正常对照组孕妇30例。所有胎盘标本在剖宫产手术后一个小时内采集完成。对细菌16sRNA基因的V3-V4区域进行扩增并进行高通量测序分析。以97%的序列一致性将得到的OTUs聚类分析、注释,以比较三组之间胎膜、胎盘菌群分布差异,然后结合测序结果及查阅相关文献针对差异性菌属进QPCR验证。[结果]1、高通量测序结果①孕妇胎盘以Firmicutes(厚壁菌门)、Bacteroidetes(拟杆菌门)、Spirochaetes、Proteobacteria(变形菌门)、Actinobacteria(放线菌门)为主。②PROM组与正常组比较:Shannon指数(3.33±0.05 比3.38±0.10)、Simpson指数(0.11±0.008比0.12±0.001)无统计学差异(p>0.05),而Chaol指数(407.98±6.10 比 450±11.30)、以及 ACE 指数(404.46±6.22 比449.89±11.75)有统计学差异(p<0.05);PPROM 组与 TPROM 组比较:Shannon指数(3.38±0.066 比 3.29±0.07)、Simpson 指数(0.10±0.007 比 0.11 ±0.014)、Chaol 指数(413.21±10.31 比 403.61±7.30)、以及 ACE 指数(410.01±10.46比 399.83±7.45)均无统计学差异(P>0.05)。③门水平菌群丰度差异:PPROM组与TPROM胎盘菌群丰度无明显差异;PROM组与正常组胎盘菌群在Firmicutes(厚壁菌门)、Bacteroidetes(拟杆菌门)、Spirochaetes、Actinobacteria(放线菌门)、Cyanobacteria(蓝藻菌门)、Spirochaetes(螺旋菌门)存在明显差异(p<0.05),而 Proteobacteria(变形菌门)无明显差异(p>0.05)。④属水平菌群丰度差异:三组之间Lactobacillus(乳酸杆菌属)无显著差异(p>0.05);PROM 组与正常组胎盘菌群在 uncultured bacterium、Clostridium(梭菌属)、Streptococcus(链球菌属)、Actinobacillus(放线杆菌属)、Catenibacterium、Terrisporobacter、Lachnospiraceae(毛螺菌科)有显著差异(p<0.05)。2、QPCR验证结果①胎膜中PPROM组乳酸菌属丰度是对照组的1/2,TPROM组也较对照组减少;PPROM组梭菌属是对照组的1.7倍,TPROM组是对照组的1.5倍;PPROM组链球菌属丰度是对照组的2.2倍,TPROM组是对照组的2倍。②胎儿面胎盘中PPROM组、TPROM组中乳酸菌属较对照组比较差别不大;PPROM组梭菌属是对照组的1.5倍,TPROM组是对照组的1.1倍;PPROM组链球菌属丰度是对照组的1.7倍,TPROM组是对照组2.3倍。③母亲面胎盘中PPROM组、TPROM组中乳酸菌属较对照组比较差别不大;PPROM组梭菌属是对照组组的1.5倍,TPROM组是对照组的1.1倍;PPROM组链球菌属丰度是对照组的1.7倍,TPROM是对照组2.3倍。[结论]1、无论正常组、未足月胎膜早破组及足月胎膜早破组胎盘并非无菌,胎盘胎膜菌群分布具有多样性。2、胎膜早破组与正常组胎盘、胎膜菌群多样性一致,但是部分菌群丰度有明显差异。3、未足月胎膜早破组乳酸杆菌属含量与C-反应蛋白水平呈负相关,而链球菌属、梭菌属含量与C反应蛋白呈正相关。