RNA干扰抑制多型性胶质母细胞瘤FGF-2和B7-H1表达的研究

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目的:1、体外研究大鼠C6胶质瘤细胞系碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF/FGF-2)以及人类多型性胶质母细胞瘤细胞系U251程序性死亡配体-1(programmed death receptor ligand 1, PD-L1/B7-H1)的表达,并对照血管内皮生长因子(VEGF)比较低氧条件下FGF-2表达量的变化以及IFN-γ对于B7-H1的诱导作用。2、研究不同序列siRNA在体外对于目的基因表达的影响,探讨不同序列和不同作用位点siRNA对目的基因的抑制作用。在mRNA和蛋白质水平,研究siRNA体外对目的基因表达的抑制作用,并探讨siRNA转染浓度、转染时间和目的基因表达之间的相关性。3、研究siRNA体外对胶质瘤细胞增殖的影响,探讨比较乱序siRNA和不同转染浓度特异性siRNA对胶质瘤细胞增殖的影响。研究FGF-2siRNA体外对C6细胞凋亡和周期的影响,探讨比较不同转染浓度,不同时间点细胞凋亡和周期的变化。4、研究FGF-2siRNA体内对肿瘤生长的抑制作用,比较不同剂量FGF-2siRNA对肿瘤生长的抑制作用。方法:1、体外C6细胞系氯化钴(CoCl2)100μM低氧培养,IFN-γ500u/ml诱导U251细胞表达B7-H1,24小时后抽取实验组与空白组总RNA,RT-PCR检测C6细胞FGF-2和VEGF以及U251细胞B7-H1mRNA的表达。2、转染C6细胞不同序列FGF-2siRNA,48小时后抽取总RNA,RT-PCR检测FGF-2 mRNA表达;转染U251细胞150nM不同序列B7-H1siRNA,24小时之后流式细胞仪检测B7-H1的表达,筛选有效siRNA。3、转染C6细胞及U251细胞不同浓度siRNA,24、48和72小时之后抽取总RNA,RT-PCR检测靶基因mRNA的表达。12、24、48和72小时小时之后提取C6细胞总蛋白,Westernblot检测FGF-2蛋白的表达,流式细胞仪检测U251细胞B7-H1蛋白的表达。
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