【摘 要】
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目的经过前期研究,筛选出苯甲酰乌头原碱作为铁死亡抑制剂。本文应用Erastin诱导成骨细胞铁死亡模型,探讨不同浓度苯甲酰乌头原碱对Erastin诱导成骨细胞铁死亡的影响及潜在机制。方法（1）体外培养小鼠MC3T3-E1成骨细胞,将细胞稀释成5个不同浓度梯度,依次为0.2×105个/ml、0.4×105个/ml、0.6×105个/ml、0.8×105个/ml、1.0×105个/ml。将 5 个浓度梯
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目的经过前期研究,筛选出苯甲酰乌头原碱作为铁死亡抑制剂。本文应用Erastin诱导成骨细胞铁死亡模型,探讨不同浓度苯甲酰乌头原碱对Erastin诱导成骨细胞铁死亡的影响及潜在机制。方法（1）体外培养小鼠MC3T3-E1成骨细胞,将细胞稀释成5个不同浓度梯度,依次为0.2×105个/ml、0.4×105个/ml、0.6×105个/ml、0.8×105个/ml、1.0×105个/ml。将 5 个浓度梯度在相同条件下连续孵育,分别于24h,48h,72h,96h,120h,144h,168h,用CCK-8法测量其OD值,绘制细胞生长曲线。（2）苯甲酰乌头原碱溶于DMSO中,配置成不同浓度溶液,分别为0 μ g/ml,1 μ g/ml,10μ g/ml,20μg/ml,50 μg/ml,100 μg/ml。将100 μl不同浓度的苯甲酰乌头原碱溶液加入实验细胞中,检测苯甲酰乌头原碱对小鼠细胞活性影响。（3）将Erastin溶于DMSO中,配置成不同浓度溶液,分别为0 μ g/ml,1 μ g/ml,10 μg/ml,20 μ g/ml,50 μ g/ml。将100μl不同浓度的Erastin溶液加入实验细胞中,检测Erastin诱导的铁死亡对小鼠细胞活性的影响。（4）取最适浓度为10 μ g/ml的Erastin溶液100 μl建立铁死亡细胞模型,加入浓度为1μ g/ml、10 μg/ml、20 μg/ml的苯甲酰乌头原碱100 μ l,检测苯甲酰乌头原碱对Erastin诱导铁死亡下小鼠细胞增殖的影响。（5）运用Western Blot技术检测苯甲酰乌头原碱影响铁死亡发生的机制通路。结果（1）.小鼠MC3T3-E1细胞的细胞周期大致为1周,其生长期大致为1-3天。（2）.苯甲酰乌头原碱在高剂量时对细胞会产生毒性作用,产生毒性反应最低浓度为10μ g/ml（3）.实验使用Erastin诱导小鼠细胞建立铁死亡模型有可行性,其建立模型时Erastin浓度为10 μ g/m。（4）.苯甲酰乌头原碱在浓度为10 μ g/ml时为抑制小鼠MC3T3-E1细胞铁死亡最适浓度。（5）.苯甲酰乌头原碱在浓度为10 μg/ml时在48h内可有效抑制Erastin诱导铁死亡的小鼠MC3T3-E1细胞死亡。结论苯甲酰乌头原碱在在一定浓度及一定时间范围内可有效抑制铁死亡的进展,可能通过Wnt/β-catenin信号传导通路来增强GPX4含量来抑制铁死亡。
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