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目的： 他莫昔芬是ER+乳腺癌病人内分泌治疗的金标准，长期的他莫昔芬治疗能引起30％的乳腺癌病人产生耐药性，并产生如子宫内膜增生、血栓形成等副作用。二甲双胍是一类广泛用于2型糖尿病治疗的一线口服药物，近年来meta分析表明二甲双胍能够降低乳腺癌的发病率及死亡率，提高乳腺癌病人的生存期。同时，体外实验表明二甲双胍能抑制乳腺癌细胞增殖、促进乳腺癌细胞的凋亡，二甲双胍与其它抗肿瘤药物联合时，能增强其他抗肿瘤药物作用的敏感性。此外，二甲双胍还能抑制他莫昔芬引起的副作用。因此，本研究旨在探究二甲双胍联合他莫昔芬对ER+ MCF-7细胞及ER-MDA-MB-231细胞生物学功能的影响并进一步探讨其所涉及的分子机制。 方法： 1.采用CCK-8实验测定他莫昔芬(0-25μM)、二甲双胍(0-25mM)单独以及联合24h、48h、72h对于MCF-7细胞、MDA-MB-231细胞的活力的影。 2.显微镜下观察他莫昔芬(MCF-7细胞:12.51μM; MDA-MB-231细胞:18.75μM)、二甲双胍(5mM)单独及联合72h对于MCF-7细胞、MDA-MB-231细胞的形态学的影响。 3.采用平板克隆实验测定他莫昔芬(MCF-7细胞:12.5μM; MDA-MB-231细胞:18.75μM)、二甲双胍(5mM)单独及联合对MCF-7细胞、MDA-MB-231细胞增殖能力的影响。 4.利用Annexin V-Fluorescein/PI流式细胞术测定两药单独及联合作用于MCF-7细胞、MDA-MB-231细胞72h后对细胞凋亡的影响。 5.运用小管形成实验测定两类药物单独及联合作用于MCF-7细胞、MDA-MB-231细胞72h后对血管状类似物形成能力的影响。 6.用transwell小室实验测定两类药物单独及联合作用MDA-MB-231细胞72h后对细胞迁移以及侵袭能力的影响。 7.用western blotting技术检测两类药物单独及联合对于细胞内p-ERK、ERK、p-JNK、JNK、β-actin、c-Myc蛋白表达的影响。 结果： CCK-8实验结果表明他莫昔芬对MCF-7细胞以及MDA-MB-231细胞表现出了双相作用，即低浓度他莫昔芬(MCF-7细胞:3.125μM、6.25μM，48h;MDA-MB-231细胞:3.125μM，48h)促进细胞的活力(P＜0.05-0.01)，较高浓度他莫昔芬(MCF-7细胞:12.5μM、18.75μM、25μM; MDA-MB-231细胞:18.75μM、25μM)以时间浓度依赖的方式抑制细胞的活力(P＜0.01);二甲双胍也以浓度和时间依赖的方式抑制了两类细胞的活力(P＜0.01)。他莫昔芬(MCF-7细胞:12.5μM;MDA-MB-231细胞:18.75μM)单独能抑制细胞的生长，使细胞数目减少，同时变圆变小的细胞数增多，二甲双胍抑制了细胞生长，当两药物联合时，细胞数目减少明显，变圆变小的细胞也显著增加。他莫昔芬(MCF-7细胞:12.5μM;;MDA-MB-231细胞:18.75μM)+二甲双胍(5mM)联合组对细胞活力、细胞生长、集落形成、小管形成的抑制作用均强于他莫昔芬、二甲双胍单独组（P＜0.01）。12.5μM(P＜0.01)、18.75μM(P＜0.01)他莫昔芬促进MCF-7细胞、MDA-MB-231细胞的凋亡，5mM的二甲双胍不诱导细胞的凋亡，两药物联合对细胞的凋亡作用显著高于他莫昔芬单独组(P＜0.01)。在MDA-MB-231细胞中，他莫昔芬（18.75μM）+二甲双胍(5mM)联合组(P＜0.01)对MDA-MB-231细胞迁移、侵袭能力的抑制作用均高于他莫昔芬(P＜0.01）、二甲双胍(P＜0.01)单独组;二甲双胍(P＜0.05-0.01)、他莫昔芬(P＜0.05-0.01)单独能以浓度依赖的方式抑制两类细胞中c-Myc蛋白的表达，两药联合对c-Myc的抑制作用显著高于两药单独组(P＜0.01）;两药物联合相对于两药物单独不表现出对MAPK家族的p-ERK/ERK、p-JNK/JNK更显著的促进表达的作用。 结论： 本研究表明二甲双胍、他莫昔芬单独及联合对乳腺癌MCF-7细胞、MDA-MB-231细胞生物学功能表现出抑制作用，其潜在的分子机制与两种药物对c-Myc的抑制有关，而与MAPK家族蛋白p-ERK、ERK、p-JNK、JNK的调节无关。本实验结果为二甲双胍联合他莫昔芬运用于乳腺癌临床治疗提供了理论基础。