嗜热菌胞外酶对链霉素菌渣溶胞机理研究

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抗生素菌渣具有污染性和资源性的双重属性。随着我国制药行业的进一步发展,抗生素菌渣的减量化、无害化和资源化的末端处理处置已成为制约制药行业发展的重要因素。抗生素菌渣富含蛋白质,对其进行资源化回收利用,是抗生素菌渣处理的关键。然而,由于超声、碱热和微波等方法存在能耗高,设备占地大等问题。因此,本研究在课题组前期研究的基础上以链霉素菌渣为研究对象,选用嗜热菌DF7,取其胞外蛋白酶对菌渣进行破壁溶胞。研究了钾离子对胞外蛋白酶的作用机理、蛋白酶对菌渣溶胞的酶促反应动力学并对菌渣中水解物的性质进行分析。取得研究结果如下:1)对嗜热菌胞外蛋白酶进行性质分析。当添加[K+]的浓度为0.3 mmol·L-1时,蛋白酶浓度达到最大值18.1 U·mL-1,Zeta电位变化不大,平均粒径由734.3 nm减小到525.6 nm。荧光光谱分析表明K+与嗜热菌蛋白酶有荧光猝灭作用,并且K+与嗜热菌蛋白酶之间有一个结合力很强的结合位点,与其中的色氨酸,酪氨酸等残基结合。2)通过嗜热菌胞外蛋白酶水解链霉素菌渣,对其酶促反应进行动力学分析,建立了胞外蛋白酶水解链霉素菌渣蛋白的动力学模型。水解速率动力学模型为r=(3.564E0/S0+1.994)exp[-0.2502(DH)],水解度-水解时间动力学模型为DH=3.997ln[1+(0.892E0/S0+0.499)t],以及动力学参数a=3.564E0/S0+1.994,b=0.2502,酶失活常数Kd=1.279 min-1。3)对提取出的链霉素菌渣水解产物性质进行分析。运用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法分析得出蛋白质分子质量为11~63 kDa,用傅里叶红外对蛋白质结构进行分析得出其主要为α-折叠结构,用氨基酸分析仪对蛋白质中氨基酸的种类和数量进行分析得出其中含有常见的17种氨基酸,添加进动物饲料中可丰富其营养价值。菌渣经过处理后由菌丝体转变为块状结构,其中的主要成分草酸钙没有发生改变。
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