第一部分 LDH大鼠模型的建立及病理动态研究目的:综合参考文献方法,建立LDH大鼠模型;对建模后不同时间点模型效果进行动态比较以期发现建模后的最佳实验节点。方法:综合文献方法并适当改进,采取大鼠自体髓核移植法建立腰椎间盘髓核突出神经根性疼痛模型。造模术后分别于不同时间节点(第7、14、21、28天)观察动物行为学状态并随机处死动物后进行血清学和病理组织学检查。结果:1.行为学观察:造模术及假手术后模型组和对照组(假手术组)大鼠均有比较明显的左后肢无力、跛行症状,神经功能评分在3级以上。术后第7天开始,对照组症状有恢复的趋势,并于14天后基本恢复正常;而模型组症状持续存在至术后第28天有好转趋势。2.病理学检查:术后第7天对照组(假手术组)神经组织可见出血及炎症细胞细胞浸润,但无神经损伤表现;模型组除可见出血及炎症细胞细胞浸润还有神经受压表现。术后第14天开始对照组出血及炎症细胞细胞浸润明显好转并于术后第21天基本恢复正常;而模型组术后第21天仍可见明显炎症细胞浸润、并出现粘连及纤维化表现,并于术后第28天出现较明显的纤维化表现。3.血清TNF-α表达的变化:对照组大鼠TNF-α表达随时间进行明显下降。造模后第7天开始模型组与对照组在各个时间节点均有显著性差异:模型组TNF-α表达显著高于对照组,至第28天模型组TNF-α表达仍明显高于对照组。结论:采取自体髓核移植法能有效的模拟建立LDH的神经根性炎症疼痛模型。造模术后第21天对照组基本恢复正常而模型组行为学表现、病理学检查及血清TNF-α表达与对照组比较均有明显差异;造模术21天后模型组有恢复的趋势。因此,造模术后第21天是比较合适的实验时间节点。第二部分龙丹腰痹丸的抗炎镇痛作用及机制研究目的:通过经典热板法、扭体法、小鼠耳廓肿胀及鼠足趾肿胀实验验证龙丹腰痹丸的抗炎镇痛作用。酶联免疫法比较龙经丹腰痹丸治疗后LDH模型大鼠血清血细胞及TNF-α、IL-1 β、β-NGF细胞因子表达的变化;蛋白芯片及原位杂交技术研究龙丹腰痹丸对大鼠椎间盘和神经组织Fractalkine和TIMP-1 mRNA表达及其他炎症趋化因子表达及对基质降解过程的影响,探讨龙丹腰痹丸治疗LDH的分子药理学机制。方法:1.通过经典热板法、扭体法、二甲苯致小鼠耳廓肿胀及角叉菜胶致大鼠足趾肿胀实验验证龙丹腰痹丸的抗炎镇痛作用。2.采取验证成功的大鼠自体髓核移植法建立腰椎间盘髓核突出神经根性疼痛模型。将实验大鼠分为8组,分别为空白组,假手术组、模型组、龙丹腰痹丸低、中、高剂量治疗组、中药对照组、西药对照组。给药21天后处死大鼠,断头取血测血细胞及其分类,ELISA法测血清细胞因子TNF-α、IL-1 β、β-NGF表达;取造模位置神经节、脊神经和椎间盘组织进行检测并运用蛋白芯片及原位杂交技术探讨龙丹腰痹丸对大鼠神经组织炎症传导通路及对椎间盘退变过程的影响。结果:1.龙丹腰痹丸低、中、高三个剂量均能显著抑制冰醋酸及热刺激所致的疼痛,龙丹腰痹丸对二甲苯和角叉菜胶诱发的急性炎症均有明显抑制作用。2.龙丹腰痹丸低、中、高三个剂量均能显著降低大鼠白细胞总数,淋巴细胞数和粒细胞数,但未见其对血红蛋白及血小板的影响。3.龙丹腰痹丸可显著下调腰椎间盘突出模型大鼠血清中TNF-α、IL-1 β表达但对血清中β-NGF表达无影响。4.与空白组和假手术组比较,模型组大鼠神经组织中Fractline mRNA和蛋白的表达均显著升高;模型组大鼠椎间盘组织中TIMP-1 mRNA的表达明显下降且神经组织中MMP-8表达升高。.5.龙丹腰痹丸可显著下调LDH模型大鼠脊神经组织中Fractalkine mRNA和蛋白的表达水平并抑制炎症局部TNF-α、γ-IFN、IL-1 β、B7-2/CD86、ICAM-1等多种炎症介质的表达。6.龙丹腰痹丸可显著增强椎间盘组织中TIMP-1mRNA的表达但抑制神经组织中MMP-8和Fas Ligand蛋白的表达。结论:龙丹腰痹丸具有显著的抗炎镇痛作用,LDH髓核突出后可能通过化学因素或自身免疫因素引起TNF-α、IL-1 β等为主的炎症因子释放并由此促使神经细胞高表达Fractalkine,龙丹腰痹丸可通过减少髓核突出后所产生的多种自身免疫性炎症因子的释放,从而抑制神经细胞膜上的Fractalkine通路诱导的趋化作用和炎症反应;同时龙丹腰痹丸也可通过增强TIMP-1的表达和抑制MMP-8及Fas Ligand的表达抑制椎间盘的退变过程。龙丹腰痹丸的治疗作用具有多靶点性。