论文部分内容阅读
目的:根据中医对肺结核的基础理论,研究黄连对患者和病原菌的影响,认识黄连治疗肺结核的作用和机制。方法:1.通过网络药理学的方法探讨黄连与肺结核的相关性。2.黄连乙醇提取及采用索氏提取法用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、无水乙醇等溶剂,其极性由小到大对黄连进行萃取,检测黄连乙醇总提物和不同萃取部位对耻垢分枝杆菌及生物膜的作用。3.筛选出活性部位并对其进行Sehadex TMLH-20柱分离,得到不同的活性组分,检测其对耻垢分枝杆菌及生物膜的作用。4.检测黄连中黄连碱、小檗碱、药根碱、盐酸巴马汀、木兰花碱、表小檗碱、非洲防己碱等单体成分对抑制耻垢分枝杆菌及生物膜的作用。结果:1.通过网络药理学方法研究发现,黄连中抗结核发挥药效的可能活性成分有黄连素等;预测的作用靶点中RELA、MAPK1、TNF、AKT1、JUN等靶点基因可能是黄连治疗肺结核的主要靶点。通过KEGG信号通路,除了黄连抗结核的作用通路外,还有作用于癌症的途径、乙型肝炎和丙型肝炎以及糖尿病并发症中的AGERAGE信号通路。2.黄连对耻垢分支杆菌及其生物膜具有抑制作用。黄连抑制耻垢分枝杆菌生物膜活性混合物主要集中在无水乙醇部位和丙酮部位,丙酮部位抑制耻垢分枝杆菌生物膜的活性最好。其抑制生物膜活性从大到小依次为:丙酮部位＞无水乙醇部位＞二氯甲烷部位＞石油醚部位＞乙酸乙酯部位。3.黄连丙酮部位用60%乙醇经过层析柱进行活性跟踪及分离后得到18种分离物,其抑制耻垢分枝杆菌生物膜活性混合物主要集中在分离物1、分离物5和分离物6部位,分离物1在终浓度0.003125 mg/ml时完全抑制生物膜生长;分离物5在终浓度0.003125 mg/ml时完全抑制生物膜生长。4.已知黄连成分,黄连碱、小檗碱、药根碱、盐酸巴马汀、木兰花碱、小檗碱、非洲防己碱对生物膜形成的影响,结果表明黄连碱、小檗碱、药根碱、盐酸巴马汀、非洲防己碱抑制生物膜的最小浓度分别为:0.01675 mg/ml、0.0125 mg/ml、0.025 mg/ml、0.05 mg/ml、0.0225 mg/ml。木兰花碱、表小檗碱、在已检测的浓度下不抑制生物膜形成。结论:1.黄连通过扶正祛邪发挥抗肺结核药效的可能活性成分有黄连素等,预测的作用靶点中RELA、MAPK1、TNF、AKT1、JUN等靶点基因可能是黄连治疗肺结核的主要靶点。2.黄连通过抗痨杀虫发挥抗肺结核药效的作用可能是具有抑制耻垢分枝杆菌及生物膜作用。3.抑制耻垢分枝杆菌及生物膜黄连丙酮部位混合物效果好于黄连部分已知单体,说明中药多成分多靶点的优点。4.黄连的化学成分如小檗碱等既可耻垢分枝杆菌,又可抑制生物膜,有双重作用,可以减少药物的治疗时间,为临床治疗提供理论依据。