畜禽的生活环境状况与畜禽产品的质量和饲养人员的健康息息相关。在畜禽饲养时,会产生一些有害气体,如氨气,硫化氢,一氧化碳等,调查表明畜禽的排泄物和垫料中尿酸的分解都会产生大量的氨气,空气中的氨气会对畜禽和饲养人员的健康造成严重的影响。中性粒细胞作为机体内的一种免疫细胞,是应对外界刺激和炎症的第一道防线,能对各种外界刺激引起的炎症做出积极的反应。本试验评估了黑龙江省某市13个鸡舍内的氨气污染情况,采用方法为使用氨气气体检测仪对该市不同位置的鸡场的氨气浓度进行检测。之后进一步探讨了氨气对鸡外周血中性粒细胞以及中性粒细胞外捕网的影响,我们在不同氨气浓度下对200只Ross-308肉鸡进行饲养,将200只肉鸡平均分成两组,第一组国标组饲养在0.38 mg/m~3浓度的氨气环境中,第二组氨气组饲养在22.7 mg/m~3浓度的氨气环境中。两组鸡均自由采食和饮水,试验周期为28天。28天后每组随机挑选10只鸡,采集外周血,用鸡外周血中性粒细胞分离试剂盒分离中性粒细胞,随后分别用PMA刺激两组中性粒细胞,观察PMA刺激前后中性粒细胞和中性粒细胞外捕网形态,ROS产生情况,随后又检测了与中性粒细胞外捕网生成和炎症方面的相关基因(MYD88、TRAF6、TLR4、TLR2、PI3K、AKT、NF-κB、NOX-2、MPO),热休克蛋白(HSP27、HSP40、HSP60、HSP70、HSP90),细胞因子(IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10),糖代谢(HK2、HK1、LDHB2、SDHB、LDHA、PFK和PK)以及炎症小体(NLRP3、caspase-1)的mRNA水平的表达量,以期从代谢以及炎症角度来阐明氨气对鸡外周血中性粒细胞的影响。试验结果表明:(1)对我国东北地区冬季某市13个鸡舍内的氨气含量进行测定,氨气浓度超标率为30.77%,最大值为40.38 mg/m~3。(2)与国标组相比氨气组的热休克蛋白HSP27、HSP40、HSP60、HSP70、HSP90,细胞因子IL-1β、IL-6和炎症小体NLRP3、caspase-1的mRNA水平表达呈上升趋势,PMA刺激后氨气组三者的mRNA表达呈现下降趋势。而对于HK2、HK1、LDHB2、SDHB、LDHA、PFK和PK的mRNA表达水平,氨气组低于国标组。表明氨气会引起中性粒细胞糖代谢和免疫功能发生障碍。(3)在扫描电镜下观察,PMA刺激后PMA+氨气组的中性粒细胞外捕网生成量低于PMA+国标组,荧光染色的结果也证明了此结论。ROS的检测结果表明正常情况下氨气组的ROS水平高于国标组,在PMA刺激后,两组ROS水平上升,但PMA+国标组高于PMA+氨气组。与国标组相比氨气组的MYD88、TRAF6、TLR4、TLR2、PI3K、AKT、NF-κB、NOX-2、MPO的mRNA表达量升高,PMA刺激后与PMA+国标组相比PMA+氨气组的mRNA表达量降低。这说明氨气会引起中性粒细胞产生呼吸爆发,通过TOLL样受体通路,降低MPO的生成,进而影响中性粒细胞外捕网的生成。综上所述,该市存在鸡舍氨气超标情况。动物试验表明氨气可以通过影响鸡外周血中性粒细胞热休克蛋白、细胞因子、糖代谢和炎症小体的mRNA表达水平降低免疫功能。也可以影响中性粒细胞呼吸爆发和MPO的生成情况,通过TOLL样受体通路,抑制中性粒细胞外捕网的生成。本次试验阐明了氨气对鸡外周血中性粒细胞以及中性粒细胞外捕网的作用机制,为家禽饲养中氨气的调控提供数据支持。