基于近红外响应纳米粒子的肿瘤细胞PI3K/Akt信号通路调控研究

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共轭聚合物纳米粒子(CPNs)是指将共轭聚合物(CPs)与两亲性聚合物组装后形成的纳米材料,不仅具有优秀的光电性质,还因其结构多样和功能可设计的特性从而具有良好的生物相容性与光稳定性。PI3K/Akt信号通路在肿瘤细胞中具有重要的调控作用,控制着肿瘤细胞的增殖和凋亡。在钙调蛋白(Ca M)的介导下,利用CPNs调控该通路可以促使癌细胞迈向凋亡。本文围绕近红外纳米粒子的设计、制备及其肿瘤细胞杀伤方面开展了以下几方面的研究工作:一、合成了具有优良光热效果的共轭聚合物纳米粒子(CPNs-C)。将聚吡咯并吡咯二酮(PDPP)和二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺(DSPE-PEG2000-MAL)利用共沉淀法制备成CPNs,在其表面利用钙调蛋白抗体进行修饰,构建成了一种具有特异性的新型共轭聚合物纳米粒子(CPNs-C),并将其运用于近红外响应的光热诱导癌细胞凋亡。利用了动态光散射实验(DLS)、紫外吸收光谱分析、光热转化能力分析、光稳定性分析以及近红外热成像实验对CPNs和CPNs-C进行了表征。CPNs和CPNs-C的粒径大小相似,在Ca M抗体的作用下CPNs-C的电性发生了较大变化。此外,两者都具有很强的光热转化能力,能在较短的时间内达到较高的温度,并且结构稳定性高,表现出了良好的光稳定性。相对于CPNs,CPNs-C具有特异性和更高的生物相容性,克服了CPNs没有选择性和导向性的缺点,为共轭聚合物在生物与细胞层次的应用奠定了基础。二、探究了在近红外光照射下CPNs和CPNs-C对癌细胞的杀伤能力和作用机理,表明CPNs-C可以通过调控PI3K/Akt信号通路诱导癌细胞凋亡。CPNs-C能在光热效应的作用下通过Ca M的介导抑制蛋白激酶B(Akt)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的磷酸化,从而使得Akt无法在细胞膜上停靠,进而改变了信号通路下游蛋白的磷酸化,促进癌细胞的凋亡。对经过CPNs和CPNS-C处理的细胞进行了细胞活性检测、激光共聚焦显微成像、流式细胞仪检测和Western blot等实验并进行了分析。经过CPNs-C作用后的细胞中Fox O3a蛋白的磷酸化程度增加,Akt p308、Akt p473和GSK-3β蛋白的磷酸化程度显著降低。与传统CPNs的光热效应相比,CPNs-C能通过调控信号通路,使得对癌细胞的杀伤效果显著提升。实现了光热治疗和诱导凋亡在癌细胞杀伤中的协同作用,为癌细胞的治疗提供了一条更为高效的方案。
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