毛细管电泳酶免疫分析电化学检测及应用

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第一章首先介绍了免疫分析的基础知识,并对毛细管电泳技术在抗原抗体分析中的应用进行了简述。最后详细的综述了毛细管电泳免疫分析(CEIA)技术。内容包括:1. CEIA 分析的方式(竞争免疫分析,非竞争免疫分析及在柱免疫分析)及其应用实例。2. CEIA 的检测方法,如激光诱导荧光(LIF)检测,紫外吸收(UV)检测,粒子计数检测及电化学检测。3. CEIA 分析的应用领域,包括蛋白质分析,药物分析,激素,病毒及其它物质的分析。这一章共引用文献134篇。第二章研究了毛细管电泳催化电化学检测辣根过氧化物酶(HRP)的方法。该方法将在柱酶催化反应和毛细管电泳分离技术结合起来。设计了一套带有在柱酶催化反应器的分离、检测装置。研究了分离测定HRP 的方法。HRP 在分离毛细管中被分离成分别对应于HRP 的三种同工酶的三个区带,然后进入反应毛细管中催化H2O2 氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB(Red)),生成具有电活性的反应产物TMB(Ox) 在反应毛细管出口端被检测。工作中,我们确定了检测HRP 的实验条件:分离缓冲液为含有2.0×10-3 mol/L H2O2 的1.4×10-2 mol/L H3BO3-3.8×10-4 mol/L Na2B4O7(pH 7.4),底物缓冲液为含有2.0×10-4 mol/L TMB(Red)的1.0×10-2 mol/L Na2HPO4-5×10-3 mol/L 柠檬酸(pH 5.0),液压高度为40 cm,分离电压为20 kV,检测电势为0.10 V(vs. SCE)。在这些条件下,三种同工酶检测的线性范围分别为2.4×10-11~2.4×10-8,4.8×10-10~2.4×10-8,4.8×10-11~2.4×10-8 mol/L,检测限分别可以达到4.8×10-12,7.3×10-11,1.6×10-11 mol/L (即分别为0.048,0.72,0.16 amol)。对1.2×10-9 mol/L 的HRP 进行10次测定,三种同工酶检测峰电量q 的相对标准偏差在2.2~2.6%之间。迁移时间tm的相对标准偏差在2.8~4.1%之间。由于利用了酶催化放大的原理,首次实现了用电化学方法在z mol 水平同时检测到HRP 三种同工酶的活性。
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