论文部分内容阅读
【目的】下丘脑-垂体-性腺轴的激活标志着青春发育的开始,该轴的过早启动与儿童中枢性性早熟的发生密切相关,然而其机制至今尚未阐明。2007年,利用高通量的基因芯片技术鉴定出大鼠和恒河猴下丘脑调控青春发育的基因网络,并得到愈来愈多研究结果的证实。目前认为青春发育并不是由单一的信号分子或信号通路所调控,而是由多种功能各异的基因所构成的网络协同作用的结果,其中EAP-1和CUX-1基因在这个网络中发挥着重要作用。本研究拟利用组织免疫荧光染色、实时荧光定量PCR以及Western blot技术以检测EAP-1和CUX-1在雌鼠青春发育前后的表达变化,探讨二者在下丘脑的表达分布及其与KISS-1、GnRH表达的关系。【方法】将雌性SD大鼠分为三组:幼年组(25日龄)、性发育早期组(35日龄)和性成熟组(42日龄)。通过实时荧光定量PCR技术测定不同发育阶段的雌性SD大鼠下丘脑KISS-1、GnRH、EAP-1和CUX-1mRNA水平,并进行弓状核(ARC)区域的组织免疫荧光检测,比较青春期前后EAP-1和CUX-1免疫反应阳性细胞的表达变化。采用Western blot的方法检测EAP-1蛋白在各个发育阶段的表达水平。【结果】1.下丘脑KISS-1 mRNA的表达水平在性发育早期组显著升高,与幼年组相比,差异具有统计学意义(P<0.01),性成熟组与之相比,差异无统计学意义(P>0.05)。2.GnRH mRNA的表达水平在性成熟组最高,与幼年组及性发育早期组相比差异均具有统计学意义(分别为P<0.01和P<0.05)。然而,EAP-1和CUX-1 mRNA的水平在各组间差异均无统计学意义(P>0.05),这与先前的研究结果相悖。3.组织免疫荧光染色显示,EAP-1和CUX-1蛋白均表达于神经细胞的胞核内,集中分布于以弓状核区域为主的第三脑室周围,部分CUX-1表达于Kisspeptin神经元。4.弓状核EAP-1阳性细胞数性发育早期组与幼年组相比显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01),性成熟组与性发育早期组相比降低,差异亦具有统计学意义(P<0.05),性成熟组与幼年组相比差异无统计学意义(P>0.05)。EAP-1阳性细胞百分率性发育早期组与幼年组相比显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01),性成熟组与幼年组相比差异亦具有统计学意义(P<0.05),性成熟组与性发育早期组相比差异无统计学意义(P>0.05)。5.CUX-1阳性细胞计数在各组间均无统计学意义(P>0.05)。6.下丘脑EAP-1蛋白的表达在性发育早期达峰值,与幼年期相比差异具有统计学意义(P<0.05),到性成熟期稍有下降,但性发育早期与性成熟期表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】EAP-1在性发育早期表达增加,其表达趋势与KISS-1一致,并且在解剖结构上与kisspeptin神经元相邻,提示其可能通过调控Kisspeptin/GPR54系统而参与青春发育启动的过程。