职业性六价铬[Cr(VI)]暴露主要来源于铬酸盐生产、电镀、铬铁生产和不锈钢焊接相关行业。Cr(VI)对人体危害严重，被IARC列为人类Ⅰ类致癌物，可诱导肺癌、鼻咽癌的发生。研究已显示 Cr(VI)诱导人类皮肤细胞毒性、染色体畸变、DNA双链断裂等。叶酸在人体生化过程中，参与一碳单位的转移，为DNA甲基化提供甲基，在细胞内可以维持基因组的稳定，在合成、维持、修补DNA过程中发挥重要作用。本研究目的主要探讨Cr(VI)对HaCaT细胞损伤以及叶酸对Cr(VI)诱导HaCaT细胞损伤的作用，为进一步研究叶酸对Cr(VI)职业性接触人群的防护作用提供理论依据。研究内容包括：　　（1）MTT法检测不同浓度Cr(VI)及不同浓度叶酸对HaCaT细胞生存率的影响，获得IC50，并选取合适染毒浓度进行下一步实验。　　（2）SCGE/彗星实验检测Cr(VI)对HaCaT细胞DNA损伤情况，以及叶酸对Cr(VI)染毒HaCaT细胞DNA损伤的影响，采用尾长、尾矩、尾部DNA％评价DNA受损程度。　　（3）5-mC免疫荧光法检测不同剂量Cr(VI)作用于 HaCaT细胞后，细胞内DNA甲基化水平的改变及叶酸在Cr(VI)所致的细胞DNA甲基化水平变化上的作用。　　（4）采用RT-PCR、蛋白免疫印迹法分别检测Cr(VI)作用于HaCaT细胞后细胞内hMLH1基因mRNA和hMLH1蛋白的表达水平变化以及叶酸对Cr(VI)致HaCaT细胞hMLH1基因和蛋白表达的影响作用。　　研究结果如下：　　（1）Cr(VI)染毒浓度升高，细胞生存率下降。当Cr(VI)染毒浓度为10.00μM及以上时，细胞生存率与对照组差异有统计学意义（P＜0.05），IC50为15.88μM。2.5-320.0 nM的叶酸对细胞生存率无影响（P＞0.05）。　　（2）非参数检验结果显示对照组与不同浓度Cr(VI)染毒组的DNA损伤指标（尾长、尾部 DNA%、尾矩、Olive尾矩）差异有统计学意义（P＜0.05）；Cr(VI)浓度为10.00、20.00、40.00、80.00μM时，尾长、尾部DNA%、尾矩均比对照组高（P＜0.05）。叶酸预处理组与正常对照组、Cr(VI)单独染毒组多组间各指标平均水平差异有统计学意义（P＜0.05），叶酸浓度为320.0 nM时，尾长、尾部DNA%、尾矩、Olive尾矩与对照组差异无统计学意义（P＞0.05）。Spearman相关分析结果显示，Cr(VI)剂量与尾长、尾部DNA%、尾矩、Olive尾矩分别呈正相关（r=0.915，P＜0.01；r=0.846，P＜0.01；r=0.879，P＜0.01；r=0.869，P＜0.01）；叶酸剂量与尾长、尾部 DNA%、尾矩、Olive尾矩分别呈负相关（r=-0.797，P＜0.01；r=-0.740，P＜0.01；r=-0.783，P＜0.01；r=-0.751，P＜0.01）。　　（3）方差分析结果显示各浓度 Cr(VI)染毒组和对照组多组间平均光密度差异有统计学意义（F=11.367，P＜0.01），LSD两组间比较结果显示Cr(VI)浓度为5.00μM以上时，平均光密度较对照组低（P＜0.05）。经不同浓度叶酸（20.0、40.0、80.0、160.0、320.0nM）预处理的细胞，各浓度叶酸组与对照组、单独染毒组组间光密度差异有统计学意义（F=9.928，P＜0.01），当叶酸预处理浓度为160.0nM、320.0nM时平均光密度比Cr(VI)单独染毒组高（P＜0.05）。Pearson相关分析结果显示Cr(VI)剂量与细胞平均光密度值呈负相关（r=-0.633，P＜0.01）；叶酸剂量与HaCaT细胞的平均光密度呈正相关（r=0.865，P＜0.01）。　　（4）χ2检验结果显示Cr(VI)浓度为5.00μM及以上时，hMLH1基因表达水平较对照组低（P＜0.01），在Cr(VI)浓度为10.00μM以上时，mRNA的表达率低于50%。Cr(VI)在中高浓度（10.00、20.00、40.00、80.00μM）时，hMLH1蛋白表达水平较对照组低（P＜0.01）。χ2检验叶酸预处理组的细胞hMLH1 mRNA水平与对照组差异有统计学意义（P＜0.01）。叶酸浓度为160.0nM与320.0nM时，mRNA表达水平比Cr(VI)单独染毒组高。叶酸较高浓度（80.0nM、160.0nM）时，蛋白表达水平较对照组和Cr(VI)单独染毒组高（P＜0.01）。