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胃癌是人类常见的恶性肿瘤,其死亡率、发病率居各种恶性肿瘤之首位。根治性手术是目前唯一有可能将胃癌治愈的方法,根治性手术治疗进展期胃癌的5年生存率为40-50%,早期胃癌为90%,患者死于复发和转移,说明常规诊断肿瘤转移的方法具有局限性。近年兴起的逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术能在10~5-10~7个正常细胞中检测出1个肿瘤细胞,其敏感性远远高于常规方法,使得微转移的检测成为可能。许多肿瘤在淋巴结、血液、骨髓等组织中检出微转移灶,对肿瘤的诊断、分期、复发和转移的诊断、手术、综合治疗的选择及疗效判断等具有极其明显的指导意义。选择恰当的靶RNA是决定RT-PCR检测结果是否准确可靠的重要因素。胃肠至今尚未发现肿瘤特异性RNA,检测时一般选择在肿瘤细胞中表达,在被检测组织细胞中不表达的组织特异性RNA。在研究大肠癌微转移时发现细胞角蛋白(CK)20非常局限在肠上皮细胞,被认为是检测肠癌微转移的良好标志物。而胃癌CK20mRNA的表达情况尚未见报道。 基于上述认识,我们用RT-PCR方法对32例胃癌组织CK20mRNA的表达情况进行了定量分析,同时对胃癌病人的淋巴结、血液的微转移进行研究,全部研究包括以下三部分。第一部分 CK20 mRNA在胃癌组织中的表达及与病理组织学类型关系的研究目的:探讨CK20 mRNA在胃癌组织中的表达情况及与病理组织学类型的关系。方法:运用RT-PCR方法检测32例胃癌组织CK20 mRNA的表达,结合计算机图像分 浙江 搏土学位论文析技术进行定量分析,并与病理组织学类型比较。结果:(1)32例胃癌组织,有26例表达,表达率为sl%; 门)表达量在0%-91%之间,平均约63%; 门)印戒细胞癌、低分化腺癌、管状腺癌表达率高,而3例粘液腺癌无1 例表达; (4)印戒细胞癌、低分化腺癌、管状腺癌平均表达量为67士23%、58土19%。 n士ZIg,组间无显著性差异(P>0儿引。结论:(1)胃癌组织中CK20 ItlttNA表达率较高; ()粘液腺癌极少表达 CKZ 0 KA; (3)不同癌组织CK20 ITlt<NA的表达量不相同。第二部分 a卜von扩增 cxm lllnna诊断胃癌淋巴结微转移的研究目的:探讨扩增CK20 ITIKN.M的RT-PCR法检测胃癌淋巴结微转移的可行性及特异性。方法:用RT-PCR扩增CK20 Ilir(h,检测胃癌病人的淋巴结及胃溃疡病人的淋巴结, 与常规病理切片法检测转移进行比较,分析与病理组织学类型的关系。结果(工)32例胃癌病人66 r巴结27枚CK20 ltttN,t表达阳性,常规病理结果 19枚阳性,微转移检出率为18%,胃溃疡病人8枚淋巴结均阴性; ()3例粘液腺癌5枚淋巴结,病理结果4M转移,而无一枚CK20 Im{NA 表达。 门)癌组织CKZD 1ill(N阴性者而病理切片有转移者CK20 OA为阻比 其余 常规病理切片阳性者,CKZ 0 mRNA亦均为阳性。 (4)4例I期病人有工例淋巴结有微转移。结论 仁)扩增CK20 tilt<NA的RT干CR法是检测胃癌瞅淋巴结微转移敏感而特异 的方法; 门)CXZ 0 1llttN.rr不能作为粘液腺癌患者诊断淋巴结微转移的靶 RNA; 门)先了解胃癌组织 CK20 1llttNA的表达情况,可提高其淋巴结微转移检测的 准确性; (4)淋巴结微转移的检测可改进分期。 2 浙江大学博土学位论文第三部分 CKZ 0 WA在胃癌病人中心静脉血中的表敞临床意义目的:探讨巢式RT-PCR扩增CK20检测胃癌病人中心静脉血中癌细胞的可行性 及临床意义。方法:巢式 RT-PCR检测胃癌病人中心静脉血及良性疾病病人中心静脉血 CKZ 0 Illi{.m.rr, 表达情况与临床病理因素进行分析。结果:()32例胃癌患者17例CK20 I[11(N阳性,阳性率为53.1%,良性病患者8 例均阴性; (2)胃癌患者血液 CK20 ItltNA的阳性率与肿瘤大小、腹腔和肝转移、临床分 期相关P<0.05),与病理组织学类型无相关性(P>0.0n; (3)3例早期胃癌患者中工例 CKZ 0 阳性。潍:Q)扩增 CKZ 0 fTll{NA的账 RT干CR方法是检测胃癌病人中心静脉血微转移 敏感而特异的方法; 门)检测胃癌患者中心静脉血微转移有助于判断肿瘤进展程度; 门)早期胃癌也可有血液微转移。