论文部分内容阅读
目前,疫苗接种依然是预防传染病的一种重要手段,某些疫苗因免疫原性差,需要相应的佐剂来提高疫苗效能,已成为众人的共识.本研究中,选择胞壁酰二肽、盐酸左旋咪唑和刀豆素作为初始材料,旨在通过如下试验筛选出一种安全高效的复合免疫佐剂.
第一部分是通过单组分佐剂不同的剂量对小鼠的免疫试验,以筛选出三种佐剂各自较好效果的剂量.经过前期试验摸索后,对三种佐剂分别设计低、中、高三种剂量,分别为盐酸左旋咪唑7.5mg/mL、22.5mg/mL、67.5mg/mL;刀豆素25mg/mL、75mg/mL、225mg/mL;胞壁酰二肽37.5mg/mL;75mg/mL、150mg/mL.将佐剂混入灭活后的PRV病毒培养液水相中,随后按照水相∶油相=1∶2进行乳化,制成含上述剂量佐剂的PRV油佐剂灭活疫苗,另制作不含试验佐剂的PRV油佐剂灭活疫苗,设空白组、白油组和佐剂组.免疫程序:白油组和佐剂组给小鼠腿部肌肉注射100μL相应疫苗,2周后进行加强免疫.并于首免后14d、27d、28d对小鼠进行断尾采血,取血清进行细胞因子(IL-2、IL-4、IFN-γ)和抗PRV特异性抗体检测,首免后28d用100μL105LD50PRV强毒株(LD50=10-6)腹腔注射小鼠攻毒,观察小鼠精神与行为状态并记录死亡情况.结果显示:(1)盐酸左旋咪唑组,高剂量组小鼠24h内全部死亡,中剂量组和低剂量组对小鼠血清中IL-2、IL-4、IFN-γ有明显的提升作用(P＜0.05或P＜0.01),且较快速提升抗体水平.攻毒保护率分别为中剂量组0、低剂量组1/5.(2)刀豆素组,各组对小鼠血清中IL-2、IFN-γ有明显的提升作用(P＜0.05或P＜0.01),对IL-4和特异性抗体并未表现出提升作用.攻毒保护率分别为高剂量组0、中剂量组0、低剂量组1/5.(3)胞壁酰二肽组,各组对对小鼠血清中IL-2、IFN-γ有明显的提升作用(P＜0.05或P＜0.01),高剂量组对IL-4和特异性抗体有明显的提升作用(P＜0.05或P＜0.01),而中剂量和低剂量组无.攻毒保护率分别为高剂量组3/5、中剂量组1/5、低剂量组0/5.说明低剂量的盐酸左旋咪唑、低剂量的刀豆素和高剂量的胞壁酰二肽的免疫效果较优,于是选择进一步试验.
第二部分是通过优化佐剂组合对小鼠的免疫试验,筛选出效果较好的复合免疫佐剂组合,之后用于本动物,即猪的免疫试验.按照上一步筛选出的剂量,对各佐剂进行分组:①组(左低+刀低)、②组(刀低+胞高)、③组(左低+胞高)和④组(左低+刀低+胞高).按照上一部分程序进行免疫和攻毒,设空白组、白油组和佐剂组.结果显示:(1)①组和④组对于小鼠血清中IL-2、IL-4和IFN-γ有明显提升效果(P＜0.05或P＜0.01).(2)②组在提升小鼠血清中IL-2和IFN-γ有明显提升效果(P＜0.05或P＜0.01).(3)③组对于提升小鼠血清中IL-2和IFN-γ含量没有明显效果,而对于提升IL-4效果较好(P＜0.01).(4)各组的攻毒保护率分别为①组0、②组2/5、③组1/5和④组4/5.综合上述结果,并比较单组分佐剂小鼠试验结果,得到④组,即左低+刀低+胞高组效果最好.
第三部分是通过猪的免疫试验来验证所筛选出的复合免疫佐剂是否有效.按照第一部分制作含复合免疫佐剂的PRV灭活疫苗,设置空白组、白油组和佐剂组,免疫程序:白油组和佐剂组每只仔猪颈部肌肉注射2mL相应疫苗,20d后二免.二免后两周攻毒:每只仔猪颈部肌肉注射2mL、滴鼻1mLPRV病毒原液.结果显示:相较于白油组,佐剂组对仔猪血清中IL-2、IL-4和IFN-γ有明显提升效果(P＜0.05或P＜0.01).攻毒后,佐剂组发病情况也较轻微.结果表明,所筛选出的复合免疫佐剂在仔猪上具有一定的应用价值.
第一部分是通过单组分佐剂不同的剂量对小鼠的免疫试验,以筛选出三种佐剂各自较好效果的剂量.经过前期试验摸索后,对三种佐剂分别设计低、中、高三种剂量,分别为盐酸左旋咪唑7.5mg/mL、22.5mg/mL、67.5mg/mL;刀豆素25mg/mL、75mg/mL、225mg/mL;胞壁酰二肽37.5mg/mL;75mg/mL、150mg/mL.将佐剂混入灭活后的PRV病毒培养液水相中,随后按照水相∶油相=1∶2进行乳化,制成含上述剂量佐剂的PRV油佐剂灭活疫苗,另制作不含试验佐剂的PRV油佐剂灭活疫苗,设空白组、白油组和佐剂组.免疫程序:白油组和佐剂组给小鼠腿部肌肉注射100μL相应疫苗,2周后进行加强免疫.并于首免后14d、27d、28d对小鼠进行断尾采血,取血清进行细胞因子(IL-2、IL-4、IFN-γ)和抗PRV特异性抗体检测,首免后28d用100μL105LD50PRV强毒株(LD50=10-6)腹腔注射小鼠攻毒,观察小鼠精神与行为状态并记录死亡情况.结果显示:(1)盐酸左旋咪唑组,高剂量组小鼠24h内全部死亡,中剂量组和低剂量组对小鼠血清中IL-2、IL-4、IFN-γ有明显的提升作用(P＜0.05或P＜0.01),且较快速提升抗体水平.攻毒保护率分别为中剂量组0、低剂量组1/5.(2)刀豆素组,各组对小鼠血清中IL-2、IFN-γ有明显的提升作用(P＜0.05或P＜0.01),对IL-4和特异性抗体并未表现出提升作用.攻毒保护率分别为高剂量组0、中剂量组0、低剂量组1/5.(3)胞壁酰二肽组,各组对对小鼠血清中IL-2、IFN-γ有明显的提升作用(P＜0.05或P＜0.01),高剂量组对IL-4和特异性抗体有明显的提升作用(P＜0.05或P＜0.01),而中剂量和低剂量组无.攻毒保护率分别为高剂量组3/5、中剂量组1/5、低剂量组0/5.说明低剂量的盐酸左旋咪唑、低剂量的刀豆素和高剂量的胞壁酰二肽的免疫效果较优,于是选择进一步试验.
第二部分是通过优化佐剂组合对小鼠的免疫试验,筛选出效果较好的复合免疫佐剂组合,之后用于本动物,即猪的免疫试验.按照上一步筛选出的剂量,对各佐剂进行分组:①组(左低+刀低)、②组(刀低+胞高)、③组(左低+胞高)和④组(左低+刀低+胞高).按照上一部分程序进行免疫和攻毒,设空白组、白油组和佐剂组.结果显示:(1)①组和④组对于小鼠血清中IL-2、IL-4和IFN-γ有明显提升效果(P＜0.05或P＜0.01).(2)②组在提升小鼠血清中IL-2和IFN-γ有明显提升效果(P＜0.05或P＜0.01).(3)③组对于提升小鼠血清中IL-2和IFN-γ含量没有明显效果,而对于提升IL-4效果较好(P＜0.01).(4)各组的攻毒保护率分别为①组0、②组2/5、③组1/5和④组4/5.综合上述结果,并比较单组分佐剂小鼠试验结果,得到④组,即左低+刀低+胞高组效果最好.
第三部分是通过猪的免疫试验来验证所筛选出的复合免疫佐剂是否有效.按照第一部分制作含复合免疫佐剂的PRV灭活疫苗,设置空白组、白油组和佐剂组,免疫程序:白油组和佐剂组每只仔猪颈部肌肉注射2mL相应疫苗,20d后二免.二免后两周攻毒:每只仔猪颈部肌肉注射2mL、滴鼻1mLPRV病毒原液.结果显示:相较于白油组,佐剂组对仔猪血清中IL-2、IL-4和IFN-γ有明显提升效果(P＜0.05或P＜0.01).攻毒后,佐剂组发病情况也较轻微.结果表明,所筛选出的复合免疫佐剂在仔猪上具有一定的应用价值.