论文部分内容阅读
背景:肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)作为肝原发性恶性肿瘤,具有发病率及病死率高,预后差的特点。多数早期HCC患者通过手术可以获益,但术后复发是严重制约HCC患者远期疗效的瓶颈。所以寻找一个有效预测患者复发转移风险的生物学指标极为重要。MALAT1(Metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1 ),也称肺腺癌转移相关转录本1,作为lncRNAs其中一员,广泛表达于多种正常组织,并具有组织特异性。然而MALAT1在多种恶性肿瘤组织及血浆中也被发现异常表达,其表达水平与肿瘤形成、发展、远处转移及预后密切相关。但有关MALAT1在肝癌组织中的研究,尤其与临床病理特征及患者预后的报道较少。目的:探讨MALAT1在原发性肝细胞癌组织的表达情况以及MALAT1的表达水平与HCC患者临床病理特征之间的关系,分析MALAT1的表达与HCC患者根治术后不同复发时间的相关性,为寻找可用于评估肝癌患者预后的生物学标志物提供临床依据。方法:采用Trizol法提取组织中的总RNA,并对RNA进行反转录。通过采用qRT-PCR方法检测73例原发性肝细胞癌患者根治术切除的癌组织以及21例HCC癌旁组织中MALAT1 mRNA的表达水平,以GAPDH为内参照,将MALAT1的mRNA实际表达量与GAPDHmRNA实际表达量比较,获得MALATl的相对表达量数值。MALAT1 mmRNA的表达水平与HCC临床病理特征之间的关系应用Mann-Whitne检验进行分析;P < 0. 05为差异有统计学意义。利用单因素分析MALAT1 mRNA的表达水平与HCC根治术后患者不同复发时间的关系。结果:1.MALAT1扩增曲线与溶解曲线MALAT1扩增曲线可见曲线呈“S”型,光滑,有明显扩增期和平台期。MALAT1溶解曲线呈单峰,未见杂峰,提示MALAT1纯度良好,溶解温度为80.96℃。2、实时荧光定量PCR测定结果在所有HCC癌及癌旁组织标本中,MALAT1均呈不同程度表达。在73例HCC癌组织中,MALAT1mRNA的表达水平显著低于癌旁组织中的表达水平,中位值 3. 15 (1.46, 6.63) VS 17.45 (8.77, 22.15),组间差异具有统计学意义(Z=2.547, P<0.001)。3、HCC组织中,MALAT1mRNA表达水平与临床病理特征的关系MALAT1mRNA表达水平与HCC肿块大小、术前AFP以及合并肝硬化有关。肿瘤最大直径>5cm组MALAT1mRNA相对表达量显著高于直径≤5cm组的表达,两者之间的差异具有统计学意义(Z=-2. 611,P=0. 009)。MALAT1mRNA表达水平在术前AFP的不同表达量间具有显著性差异(Z=6. 201, P=0. 045)。其中,AFP>400 μ g/L的HCC组MALAT1mRNA的表达显著高于40<AFP≤400μ g/L 组,40<AFP≤400 μ g/L 组 MALAT1mRNA 的表达显著高于 AFP≤40 μg/L,提示随着术前AFP表达量的增加,MALAT1的表达水平增高。在合并肝硬化HCC组织中,MALAT1mRNA的表达水平为3. 91 (1.9443,9.6541),显著高于无合并肝硬化HCC的表达水平2. 08 (1. 2854, 3. 3997),两组之间的差异具有统计学意义(Z=-2. 351, P=0. 019)。MALAT1表达水平在不同年龄、性别、民族、烟酒史、家族史、肝炎病史,以及不同水平的ALT、AST、TB、肿块数目、有无包膜、血管侵犯、组织学分级、TNM分期、BCLC分期等临床病理特征之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。4、MALAT1mRNA的表达与HCC术后不同复发时间的关系73例HCC患者中,出现术后复发44例,未出现复发29例。根治术后的HCC患者中,MALAT1mRNA表达水平的差异在不同复发时间段具有统计学意义(Z=9.437,P=0.028)。其中,根治术后6个月内复发的患者MALAT1mRNA表达水平最低,根治术后12～18m出现复发的患者其MALAT1mRNA表达水平最高,提示MALAT1mRNA的表达水平与HCC根治术后复发时间有关,但MALAT1在原发性肝癌术后复发转移机制中所起的作用值得进一步研究。结论:1.MALAT1在癌旁组织中的表达显著高于癌组织。2. MALAT1的表达水平在术前APF>400 μ g/L组显著增高。3.在肿瘤大小>5cm组MALAT1的表达水平显著增高。4.癌组织中MALAT1表达升高提示HCC患者在术后12～18m容易出现复发,可作为预测HCC患者根治术后复发风险的指标。