驼乳蛋白中降血糖生物活性肽的制备及鉴定

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lqgomqj
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糖尿病是影响人类健康的常见疾病之一,其危害性大,防治效果差,备受人们关注。近年来,比化合药物具有更多优势的食源性降血糖生物活性肽被开发利用,显示出广泛的应用前景。驼乳作为一种绿色无公害的天然乳源,其营养成分独特,容易消化吸收,营养价值远高于其他动物乳。其中的蛋白质含量和种类十分丰富,还含有特殊的生物活性成分等,在防治糖尿病方面表现的格外突出。因此,本论文旨在利用木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶和碱性蛋白酶水解驼乳蛋白,对其酶解工艺、降血糖活性、氨基酸组成、分子量分布以及肽段序列进行比较研究,以期获得高活性的驼乳源降血糖生物活性肽。1.不同的蛋白酶水解相同的底物蛋白具有各自最佳的酶解工艺条件,且水解程度也不尽相同。四种蛋白酶在各自最佳的酶解工艺条件下,蛋白质水解度由高到低依次为FW>FH>JX>MG。水解程度越大,其所含的游离氨基酸浓度越高。与蛋白质水解度结果相同,风味蛋白酶在酶用量为7%,酶解温度为50℃,酶解pH为7.0,酶解时间为4.5 h的最佳酶解工艺条件下水解驼乳蛋白所得产物的游离氨基酸浓度最高,达140.23 mmol/L。SDS-PAGE凝胶电泳显示,驼乳蛋白已经被水解成多肽,酶解效果好,水解彻底。FW的MALDI-TOF-MS图谱洗脱峰较多,相比于其它三种蛋白酶水解驼乳蛋白可以获得更多的小分子肽。2.复合蛋白酶在酶用量为6%,酶解温度为55℃,酶解pH为6.5,酶解时间为4h的最佳酶解工艺条件下水解驼乳蛋白,产生了一些具有生物活性的肽段,导致其酶解产物具有良好的降血糖活性(α-淀粉酶抑制活性为66.97%、α-葡萄糖苷酶抑制活性为9.03%和DPP-IV抑制活性为52.58%)。并且FH在胃肠消化后的三种抑制活性依次递增,保持了良好的活性,比较稳定。肽序列分析显示,MG、FW、FH和JX有4种相同的肽段,差异性肽段分别有22、73、33和57种。酪蛋白被四种蛋白酶分解的最多,是主要的蛋白质分解来源。3.层析后组分FHCX-1的α-淀粉酶抑制活性为87.41%、α-葡萄糖苷酶抑制活性为21.72%和DPP-IV抑制活性为77.12%,显著高于FHCX-2(p<0.05)。从中筛选出两条具有潜在生物活性的肽段LPLPLPLR和LPPLLLRP,分子量都为917.61 Da。肽段主要是以疏水性氨基酸:L(Leu)亮氨酸和P(Pro)脯氨酸组成,证明了降血糖活性与其含有的疏水性氨基酸有关。预测发现,这两条肽段都有多个抑制酶的活性结合位点,发挥着重要的降血糖作用。
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