【摘 要】
：
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是一种具有多种生物学活性的细胞因子。GM-CSF对机体炎症,肿瘤以及其他一些疾病都有较好的抑制或辅助治疗作用,同时还具有明显的免疫增
论文部分内容阅读
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是一种具有多种生物学活性的细胞因子。GM-CSF对机体炎症,肿瘤以及其他一些疾病都有较好的抑制或辅助治疗作用,同时还具有明显的免疫增强作用,具有很好的应用前景。研究具有生物学活性的GM-CSF蛋白的体外表达具有重要意义。本研究开展了猪GM-CSF (pGM-CSF)基因毕赤酵母体外表达研究。1、毕赤酵母表达载体pPIC9K-pGM的构建研究针对含有pGM-CSF全部编码区基因的载体19T-GM设计一对引物,扩增出pGM-CSF去信号肽的成熟编码区基因,大小为384bp; pGM-CSF基因插入pMD19-T Simple Vector,成功构建pMD19-T-pGM克隆质粒；pMD19-T-pGM经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后,回收pGM-CSF基因,插入经相同双酶切处理的载体pPIC9K中,构建毕赤酵母表达载体pPIC9K-pGM,对pPIC9K-pGM进行PCR鉴定和双酶切鉴定,结果表明成功构建pPIC9K-pGM表达载体。2、GS115/pPIC9K-pGM重组菌的筛选将pPIC9K-pGM经SacⅠ线性化再乙醇沉淀回收,电转化毕赤酵母宿主菌GS115感受态细胞,接种于YPD平板上,在30℃培养3d,培养基长出乳白色菌落,表明pPIC9K-pGM重组子转化成功；重组子进行G418/YPD浓度梯度筛选,结果在4mg/mL的G418/YPD培养基上获得高拷贝重组子；将高拷贝重组子进行表型鉴定筛选,成功筛选到Mut+型高拷贝重组子；将Mut+型高拷贝重组子进行PCR扩增,扩增出预期的384 bp片段,表明重组子筛选正确,并将此高拷贝重组菌命名为GS115/pPIC9K-pGM。3、GS115/pPIC9K-pGM重组菌在毕赤酵母中表达将GS115/pPIC9K-pGM于BMGY培养基中激活培养至OD600达2.0～2.5时收集菌体,BMMY培养基调至OD600=1.0,于30℃,300 r/m的空气培养箱进行培养表达,同时每24 h添加甲醇一次,使其终浓度为1%(v/v)。将表达产物进行间接ELISA和SDS-PAGE检测,结果表明pGM-CSF获得表达,表达蛋白的分子量约为18 kD,且表达最佳时间为4 d。将表达蛋白进行western-bloting分析,结果表达蛋白能与pGM-CSF阳性血清特异性结合,表明产物具有反应原性。将表达的pGM-CSF蛋白过滤除菌后进行TF-1细胞增殖试验,该蛋白具有促进TF-1细胞增殖的能力,且活性高达(0.88～1.05)×104IU/μg,表明产物具有较高生物学活性。
其他文献
本文介绍了在招远金矿灵山五号脉进行下向分层进路回采胶结充填采矿法的试验情况,着重论述了这种采矿方法的适应条件和回采工艺的特点,并对其技术经济指标和经济效益作了初步
摘 要： 学生的差异是客观存在的，这就要求教师在教学中要根据他们之间的差异实施差异教学，否则我们的教学就将是不合理的、违背教学规律的。 差异教学要求教师转变教育观念，认可、了解、关心尊重每一位学生，遵循教育规律。在实施差异教学的过程中，对学生实施差异分层，调动学生学习的积极性，强调学生学有所得和个性发展，让学生能够在原来的基础上都有所发展。 关键词： 差异教学 个体差异 初中英语教学 采
摘 要： 姚苧田在《史记菁华录》中对《史记》中补叙这一叙事手法进行了系统的叙述，姚氏言语较分散，但理论之中已经呈现出对现代叙事学中叙事时间这一理论的回响，本文特就这一点略加分析。 关键词： 《史记菁华录》 补叙 叙事时间 一维性 多维性 一 明清两代，科举考试中的应试文体八股文对写作规范要求更加严格，促使文人致力于文章写作技巧的挖掘，也更加积极于文章写作方法的追求，这就出现了评点。《史记
摘 要： 教师产生职业倦怠会对学生、教师本人和教育事业，甚至是整个社会的发展产生严重的消极影响，因此对教师职业倦怠的研究意义重大。作者选取了中小学教师这一群体作为研究对象，分析了产生职业倦怠的客观方面的原因，并提出相应的调节方法，以对克服教师职业倦怠问题有所帮助。 关键词： 中小学教师职业倦怠 原因 调适策略 中小学教师是极易产生职业倦怠的职业。国内研究表明：我国中小学教师普遍存在职业倦怠
摘 要： 《洛丽塔》从被禁到成为畅销书，再到成为最有影响的书籍，这样的转变可以看出人们对于这部小说的关注和对其态度的转变。这部小说自始至终贯穿着悲剧的影子，可以说这是一部永恒的悲剧之作，是悲剧的经典代表作，是非常引人深思和发人深省的。本文通过对小说中悲剧的解读，以使读者更好地理解小说的悲剧性，以正确的观点和态度看待其悲剧性，引发读者的深思。 关键词： 小说《洛丽塔》 态度 悲剧 深思 一、
摘 要： 作者运用文献资料法、录像观察法、问卷调查法、逻辑分析法、数理统计法等，对中国男篮控球后卫同世界强队控球后卫传球技术运用的对比进行了研究，研究结果表明：中国控球后卫运用传球技术的能力差且成功率较低。 关键词： 北京奥运会 中国男篮控球后卫 传球技术运用 1.引言 传球技术是衡量一个球队运动技术水平是否成熟的重要标志［１］。它是进攻队员在场上相互联系和组织进攻的纽带，是实现技术、战
摘 要： 语言的意义问题一直是语言哲学研究的核心问题之一，考察语言哲学的大致演进历程可以看出，不同的语言哲学家们对它所采取的研究角度、方法，以及所得的结论都各有特点。本文简要回顾了语言哲学家们尤其是传统语义学家们对语言的意义问题所进行的一些研究，并重点围绕约翰·塞尔的意向性—意义理论进行论述，阐述了塞尔通过分析心灵哲学—语言哲学这一研究进路以阐释意向性在语言意义的产生过程中的机制特征。 关键词：
产生于盛唐时代的刘知几《史通》,是我国古代最系统、最具特色的体例完备的历史学理论著作。刘知几不但在著作名称上标新立异,而且在著作框架的设计和论述方法上都独具特色。
摘 要： 在传统的初中英语教学方式下，教师的“教”与学生的“学”经常是“脱节”的，影响了初中英语教学质量的进一步提高。怎样才能使得教师的“教”与学生的“学”相辅相成呢？这就要求教师在初中英语教学过程中密切观察每一个学生的学习动态，并及时处理相关“反馈信息”，以确保初中英语教学质量的稳步提高。 关键词： 初中英语教学 信息反馈 有效运用 英语是一种重要的国际交际工具。教师在初中英语教学过程中
摘 要： 隐喻不仅仅是一个纯语言的现象，也是一种与人类社会发展规律密切相关的一种认知现象。所以随着认知语言学的发展，隐喻也越来越受到大家的关注。它与人的思维方式和思维的发展史密切相关。本文主要是针对汉语中常出现的词汇“心”作一个简单的隐喻分析，来说明隐喻在我们的生活的语言使用中有着不可忽视的地位。 关键词： “心” 实体隐喻 容器隐喻 空间隐喻 1.引言 认知语言学发展之前，语言学家们都