近年来,随着人们生活水平的普遍提高,传统的生活方式发生了巨大的改变。诸如精神压抑、暴饮暴食、长期熬夜等因素直接导致男性精子质量水平普遍下降。如何有效提高男性生育能力成为当下的热点话题。但是目前西医除去人工授精、试管婴儿等辅助生殖技术以及感染、梗阻等病因明确的疾病,临床上尚无有效解决男性不育症的治疗方法。同时,研究表明辅助生殖技术虽然可以解决部分患者的生育问题,但是其远期影响尚未可知。因此,广大临床医生将目光转向中医药对于男性不育症的诊治。本病的中医药治疗方法历史悠久,基础坚实,且临床疗效明显。这种情况下,如何充分挖掘本病的中医药特色疗法已经成为一个重要的课题。本文首先对左归丸治疗肾阴亏虚型少弱精子症的临床疗效进行系统评价；然后探索使用雷公藤多苷制备少弱精子症大鼠模型,研究其用药剂量及时间的最佳组合,制备相对合理的少弱精子症模型；之后设计保护实验和治疗实验,每个实验包含正常组、模型组以及治疗组,综合评价左归丸对少弱精子型模型大鼠脏器系数、精液质量、性激素水平、附睾肉毒碱、抑制素B水平的影响,从药效学角度对左归丸的治疗效果进行评价；最后,采用免疫组织化学、western blot以及Real-Time PCR检测技术,对保护实验以及治疗实验中各组睾丸组织Bax、Bal-2、SCF、 Ki67蛋白及mRNA表达水平进行检测,对左归丸可能的抗凋亡及促增殖的作用机制进行定性及定量分析。第一部分左归丸治疗少弱精子型男性不育症的临床研究目的：研究左归丸对肾阴亏虚型少弱精子症患者的临床疗效。方法：因本病尚无合适的阳性对照药物,故采用自身前后对照进行临床观察。本方法的治疗周期为90天,每日给予42例入组的肾阴亏虚型少弱精子症患者左归丸中药配方颗粒剂进行治疗。患者用药前及结束后分别进行1次精液常规检查；研究开始后,每30天对入组患者进行随访一次,随访时对患者中医证候进行评分并严格记录合并用药和不良事件,若出现不良反应报告则及时向上级医师汇报,并进行相关处理。同时在研究期间详细记录患者配偶怀孕情况。系统评价左归丸对于肾阴亏虚型少弱精子症患者精液质量各项指标以及中医证候的改善情况,综合探讨其临床疗效。结果：与治疗前相比,使用左归丸进行治疗后精液量、液化状态、精子总活动力、a级精子百分率、非前向运动精子百分率、b级精子百分率、精子浓度、精子总数等指标均有明显提高,差异性显著,具有统计学意义(p<0.01)；中医证候总评分以及肾阴亏虚相关中医症候评分随着随访次数的增加以及时间的延长,呈明显的下降趋势,差异性显著,具有明显的统计学意义(p<0.01)；左归丸配方颗粒安全性较高,整个研究过程中未见不良反应报告。结论：左归丸能够安全有效的提高肾阴亏虚型少弱精子症患者的精子质量各项指标,提高男性的生育能力,同时能够改善患者的中医相关症状,特别是对肾阴亏虚相关症状改善效果显著。第二部分雷公藤多苷诱导少弱精子型大鼠模型的研究目的：研究多种雷公藤多苷用药剂量以及造模时间的组合,并观察停止用药后各组大鼠自身恢复情况,制备少弱精子型大鼠模型。方法：将96只雄性SD大鼠随机分为正常组、雷公藤多苷大剂量组、中剂量组以及小剂量组。其中正常组采用去离子水进行干预；雷公藤多苷各剂量组分别采用50 mg/ (Kg·d)、40 mg/(Kg·d)、30mg/(Kg·d)的雷公藤多苷进行干预。给药第3周及第4周后,每组中选取SD大鼠4只取材；第4周取材后,每组选取4只按照上述实验方案继续喂养,并在第5周进行取材,剩余的大鼠在第4周给药完成后就停止进行干预,并在实验开始后的第6、7、8周,每周每组取材4只实验大鼠,观察其生殖相关功能的恢复情况并进行相关记录。结果：造模期间(第3周至第5周),一般状态、生殖器官脏器系数、精液质量各项指标随着雷公藤多苷用药剂量增大以及用药时间的延长呈显著的降低趋势；睾丸组织病理损伤程度随着雷公藤多苷用药剂量增大以及用药时间的延长呈显著的增高趋势。停止用药后(第6周至第8周),雷公藤多苷小剂量组上述指标逐渐恢复至正常组水平,未见明显差异性；中剂量组上述各项指标略有恢复,但与正常组相比仍有较大差距；大剂量组生殖功能损伤未见明显恢复。结论：综合考虑造模时间、经济成本以及大鼠的自我恢复情况,采用40mg/(Kg·d)的雷公藤多苷干预4周后可以得到少弱精子型大鼠模型。第三部分左归丸对雷公藤多苷诱导的少弱精子型模型大鼠的药效学研究目的：观察左归丸对少弱精子型模型大鼠一般状态、脏器系数、精液质量、睾丸组织病理改变、性激素水平、附睾肉毒碱、抑制素B的影响。方法：将72只雄性SD大鼠随机平均分为治疗实验和保护实验；每个实验又随机分为正常组、模型组、左归丸组,每组12只大鼠。在保护实验中,正常组采用去离子水进行干预,共计4周；模型组采用40mg/(Kg·d)的雷公藤多苷进行造模,共计4周；左归丸治疗组采用40mg/(Kg·d)的雷公藤多苷进行造模,同时采用6g/(Kg·d)的左归丸混悬液(相当于人体用药20倍)进行保护性干预4周。治疗实验中,正常对照组采用去离子水进行干预8周；模型组实验前4周采用40mg/(Kg·d)的雷公藤多苷进行造模,实验第5至8周采用去离子水进行干预；左归丸治疗组实验前4周采用40mg/ (Kg·d)的雷公藤多苷进行造模,实验第5至8周,采用6g/(Kg·d)的左归丸混悬液(相当于人体用药20倍)进行干预。结果：在保护试验中,左归丸组与模型组相比,在大鼠睾丸脏器系数、附睾脏器系数、精囊腺脏器系数、精液质量各项指标、睾酮水平、血清抑制素B方面具有显著的差异性,具有明显的统计学意义(P<0.05或P<0.01)；在治疗试验中,与雷公藤多苷模型组相比,左归丸组在大鼠睾丸脏器系数、附睾脏器系数、前列腺脏器系数、精液质量各项指标、睾酮水平、血清抑制素B具有明显的差异性,具有明显的统计学意义(P<0.05或P<0.01)；在保护实验与治疗实验两个实验中,左归丸组大鼠一般状态、睾丸组织病理损伤程度与模型组相比都明显减轻。结论：左归丸可以有效改善模型大鼠一般状态、生殖器官脏器系数、精液质量、睾酮水平、血清抑制素B水平,具有明显的保护及治疗作用,效果明显。第四部分左归丸对少弱精子型模型大鼠的抗细胞凋亡机制及SCT、Ki67表达的研究目的：观察左归丸对少弱精子型模型大鼠细胞凋亡调控因子Bax、Bcl-2蛋白以及mRNA的影响；同时观察左归丸对少弱精子型模型大鼠SCF、Ki67蛋白及mRNA表达的影响方法：分别采用免疫组织化学、western blot以及Real-Time PCR技术,对上述左归丸药效学研究中的保护实验和治疗实验中全部大鼠睾丸组织进行Bax、Bcl-2、SCF、Ki67蛋白及mRNA表达的检测。结果：保护实验,免疫组织化学检测中,与模型组相比较,左归丸组Bax、Bcl-2、 SCF、Ki67蛋白具有明显的差异性,具有显著的统计学意义(P<0.05或P<0.01)；western blot检测中,左归丸组与模型组相比较,Bax、Bcl-2、SCF蛋白具有差异性,P<0.05,具有统计学意义；Real-Time PCR检测中,与模型组相比较,左归丸组Bax、Bcl-2、SCF、 Ki67 mRNA具有明显的差异性,P<0.05或P<0.01,具有统计学意义。治疗实验,免疫组织化学检测中,与模型组相比较,左归丸组Bcl-2、SCF、Ki67蛋白具有明显的差异性,P<0.05或P<0.01,具有统计学意义；western blot检测中,左归丸组与模型组相比处于相同水平,未见明显差异性,但是Bcl-2以及SCF表达水平明显高于模型组；Real-Time PCR检测中,左归丸组与模型组相比较,SCF、Ki67mRNA表达水平明显提高,具有明显的差异性,P<0.05或P<0.01,具有统计学意义；结论：左归丸可以有效调控模型大鼠Bax、Bcl-2、CF、Ki67蛋白及其mRNA的表达,具有明显的抑制生精细胞凋亡、促进生精细胞增殖的作用。