第一部分 极低出生体重儿母亲不同时期母乳的多肽组学比较目的:通过比较分析极低出生体重儿母亲初乳、过渡乳及成熟乳之间的多肽组学差异,筛选具有潜在生物学功能的母乳源多肽。方法:利用我们已经建立的母乳库,收集2016年12月至2017年2月在南京医科大学附属妇产医院新生儿科住院治疗的极低出生体重儿母亲的初乳、过渡乳以及成熟乳样本。从中随机抽取初乳、过渡乳、成熟乳各2例,每例样本由3名不同的母亲相应时间段的母乳混合而成。利用液相色谱串联质谱技术比较不同时期母乳的多肽组学差异。由于初乳中的生物活性成分较过渡乳、成熟乳更丰富,故筛选出同时满足初乳较过渡乳、初乳较成熟乳差异倍数大于2倍且具有统计学意义(P<0.05)的多肽,利用Uniprot、Swiss Prot等数据库对这些差异性多肽的基本生物学信息进行分析,并利用IPA软件、KEGG数据库等对差异性多肽可能发挥的生物学功能进行初步预测。结果:我们从6例样本中总共鉴定并量化了3182条非冗余多肽,差异表达倍数大于2倍的多肽有280条,包括144条表达上调的多肽和136条表达下调的多肽,其中有30条多肽来源于前体蛋白Beta-casein,包括22条上调的多肽和8下调的多肽。差异表达多肽的等电点主要集中在酸碱两侧,分子量分析基本符合质谱鉴定的大小范围(<3kDa)。基因本体分析与Pathway分析结果显示这些差异表达多肽富集了多种生物学过程,其中主要为脑和神经发育以及抗病毒等功能。我们重点关注了产生差异多肽数量最多的前体蛋白Beta-casein,发现其产生的多肽序列与许多具有明确功能的功能肽极其相似。结论:不同时间段母乳的多肽表达谱具有明显的差异,其中来源于Beta-casein的多条差异表达多肽可能具有免疫调节、抗菌及抗氧化等生物学活性。第二部分不同处理方法和泌乳时间对母乳中宏量营养素含量影响目的:探讨巴氏消毒、冷冻温度及时间、泵奶速度、时长及泵奶管道类型对母乳宏量营养素的影响,及一天中不同时间段分泌的母乳的宏量营养素和能量是否存在差异。方法:收集2016年4月至12月在南京医科大学附属妇产医院新生儿科住院治疗的228名患儿母亲的242份母乳样本,检测巴氏消毒、冷冻温度及时间、泵奶速度、时长及泵奶管道类型对母乳宏量营养素的影响以及一天中不同时间段分泌母乳的宏量营养素是否存在差异。在进行相应处理前后各抽取5 ml母乳,使用母乳分析仪检测其中的宏量营养素和能量,并用配对t检验、重复测量的方差分析、单因素方差分析及LSD-t检验进行统计学分析。结果:巴氏消毒后较消毒前,母乳中脂肪、蛋白质含量及能量下降[分别为(3.69±0.98)与(4.22±1.00)g/dl,t=9.405;(2.12±0.34)与(2.21±0.34)g/dl,t=4.785;(69.77±9.35)与(74.94±9.53)kcal/dl(1kcal=4.184k J),t=9.470],碳水化合物含量上升[分别为(6.66±0.17)与(6.62±0.17)g/dl,t=-3.442],差异均有统计学意义(P值均<0.01)。-80℃较-20℃冷冻母乳的蛋白质含量高,差异有统计学意义(P温度<0.05)。-20℃储存的母乳,在冷冻7、15、30、60和90 d时脂肪、蛋白质含量和能量较新鲜母乳均下降,冷冻90 d时下降最为明显;而碳水化合物含量在冷冻15、30和60 d时较新鲜母乳升高,冷冻90 d时较30和60 d时下降;-80℃储存的母乳脂肪、蛋白质含量和能量在冷冻60和90 d时较新鲜母乳下降,碳水化合物含量在冷冻60 d时最高(LSD检验,P值均<0.05)。不同的泵奶速度(5 ml/h、10 ml/h及15 ml/h)下,母乳的脂肪、蛋白质、碳水化合物含量及能量均无统计学差异(P速度>0.05)。不管是通过6、8、10号胃管还是输液连接管,泵奶1、2和3h时的母乳脂肪含量较未进行处理的新鲜母乳降低(LSD检验,P值均<0.05);通过6号胃管的母乳在泵奶2和3 h时,以及通过8、10号胃管及输液连接管的母乳在泵奶1、2和3 h时的能量较未进行处理的新鲜母乳均降低(LSD检验,P值均<0.05)。母乳脂肪含量和能量在12:01~15:00这一时间段分别为(5.16±0.93)g/dl和(86.96±9.35)kcal/dl,高于00:01~03:00[分别为(4.54±0.75)g/dl和(80.77±7.75)kcal/dl]、03:01~06:00[分别为(4.61±0.75)g/dl和(81.44±7.69)kcal/dl]和21:01~24:00[分别为(4.71±0.88)g/dl和(82.44±8.82)kcal/dl],母乳脂肪含量在09:01~12:00这一时间段为(5.01±0.94)g/dl,高于00:01~03:00和03:01~06:00,母乳能量在09:01~12:00这一时间段为(85.31±9.62)kcal/dl,高于00:01~03:00(LSD检验,P值均<0.05)。结论:为满足婴儿生长发育需求,条件允许的情况下尽可能选择亲母喂养,减少母乳处理操作。