钝顶螺旋藻藻蓝蛋白的提取纯化精制研究及应用

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中国是螺旋藻(节旋藻)养殖面积最大、产量最多的国家。其中钝顶螺旋藻是最为主要的养殖品种之一,也是商业化生产主要品种。藻蓝蛋白是一种珍贵的天然蓝色素,是高附加值产品。如何高效和便捷地提取纯化藻蓝蛋白仍是工业生产需解决的技术难题。因此,本研究主要探讨螺旋藻破碎提取藻蓝蛋白的方法及其藻蓝蛋白的精制纯化,以期获得较好的提取效率和产品纯度。论文研究内容和实验结果如下:比较高速匀浆法(SH)、超声波破碎法(U)、反复冻融法(F)、高压微射流均质法(PH)、酶法处理(E)五种方法对螺旋藻细胞破碎程度及藻蓝蛋白释放的影响,结果表明:高压微射流均质>高速匀浆法>超声波破碎法>反复冻融法>酶法处理,高速匀浆法具有较好的破碎藻细胞效果,藻蓝蛋白得率较高。探讨高速匀浆法提取藻蓝蛋白过程中的各因素对其得率和产品纯度的影响,通过单因素与正交试验,确定最佳提取条件。结果表明:采用pH 7.0的PBS缓冲液为提取溶剂,藻蓝蛋白得率最高为157.75 mg/g,溶剂添加量为藻粉20倍,30℃下,分3次高速匀浆处理40 min,藻蓝蛋白得率达213.32 mg/g。比较乙醇沉淀法、酸沉淀法和盐沉淀对藻蓝蛋白回收率的影响,结果表明硫酸铵沉淀法较佳,50%硫酸铵沉淀可使藻蓝蛋白回收率达97.10%,藻蓝蛋白的纯度最高达1.0。进一步采用20%硫酸铵与50%硫酸铵分级盐析回收藻蓝蛋白,结果表明,可回收藻蓝蛋白80%,纯度可达2.3,达到市售藻蓝蛋白纯度。与两种商品藻蓝蛋白产品相比,纯度2.3的藻蓝蛋白在色价、色泽、藻蓝蛋白含量、藻蓝蛋白纯度方面表现较好。对比两种阴离子交换色谱对藻蓝蛋白进一步纯化的影响,结果表明,采用弱阴离子交换柱DEAE Tanrose FF优于强阴离子交换柱。采用pH值为8.0 Tris-HCl作为平衡缓冲液,0.2mol/L的NaCl洗脱,藻蓝蛋白纯度在3.0以上。通过SDS-PAGE凝胶电泳分析和光谱分析(紫外-可见分光光度法和荧光分光光度法)鉴定色谱纯化的藻蓝蛋白,符合藻蓝蛋白特征。评价藻蓝蛋白的抗氧化性,自由基清除实验表明藻蓝蛋白具有较好的自由基清除能力。藻蓝蛋白酸乳产品的配方和工艺表明复原乳中:藻蓝蛋白添加量0.25g/L,白砂糖添加量9%,奶粉添加量10%,发酵时间8h,所得藻蓝蛋白酸乳色泽淡蓝色,奶香浓郁,口感良好。与普通酸乳相比,藻蓝蛋白酸乳还原能力、自由基清除能力增强,大大提升了酸乳的抗氧化性。产品质量检验,藻蓝蛋白酸乳的酸度79.5°T,蛋白质含量3.65 g/100g,乳酸菌数为1×107cfu/mL,符合国家标准。
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