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研究背景与目的:结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,其发生、发展、侵袭和转移是一个多阶段、多步骤、多基因参与的复杂过程。AHNAK又称桥粒联结蛋白(desmoyok),是一种大小约700kDa的支架蛋白,目前有报道AHNAK参与多种肿瘤通路,发挥生物学作用,并有作为独立预后因子的潜在临床意义。本研究通过TCGA、TIMER数据库分析AHNAK在结直肠癌中的表达及免疫浸润相关性,以及应用免疫组化技术检测临床标本,对其在结直肠癌及肝转移癌组织中的表达情况、以及在结直肠癌侵袭转移中的作用作初步探讨。材料与方法:1、标本来源:收集2017年07月-2019年06月于扬州大学临床医学院(江苏省苏北人民医院)行手术治疗的结直肠癌及结直肠癌肝转移患者的38例组织标本。所有患者均首次手术,术前均未行任何放化疗。2、实验方法:结合TCGA数据库分析探讨AHNAK在结直肠癌中的表达情及预后相关性,与肿瘤组织中浸润性免疫细胞B细胞、CD4T细胞、CD8T细胞、中性粒细胞、巨噬细胞和树突状细胞的免疫相关性,同时分析AHNAK与肿瘤微环境中免疫检查点基因表达相关性。最后通过免疫组织化学染色研究38例结直肠癌及肝转移癌标本中AHNAK蛋白表达情况及与临床病理之间的相关性。结果:1、利用GTEx数据集分析了 AHNAK基因在各个组织中的表达水平,数据库分析了 308例样本,结果显示,AHNAK基因在结直肠组织中表达明显。2、提取并分析了 GTEx数据集中结肠腺癌(COAD)样本(癌组织158例,正常组织349例)及直肠腺癌(READ)标本(癌组织167例,正常组织10例),分析了两者之间AHNAK基因表达情况,结果显示与正常组织相比,AHNAK在结直肠癌组织中高表达(P<0.001)。3、通过TIMER数据库分析结直肠癌中AHNAK表达与B细胞、CD4T细胞)、CD8T细胞、中性粒细胞,巨噬细胞和树突状细胞浸润呈正相关(p<0.05),其结果表明AHNAK表达与结肠癌免疫细胞浸润相关性明显4、进一步,分析AHNAK基因表达与免疫检查点基因的表达关系,分别提取了这些免疫检查点基因,计算与AHNAK基因的表达相关性,结果表明常见免疫检查点基因包括CTLA4、CD48、CD28等与AHNAK表达显著相关(p<0.05)。5、免疫组化染色结果显示AHNAK在结直肠癌组织中的表达率显著高于癌旁组织(p<0.05),正常组织表达阴性。免疫组化染色结果显示AHNAK蛋白在肿瘤组织中主要表达在细胞核、细胞膜、细胞浆,部分表达于肿瘤间质。6、进一步应用免疫组织化学染色分析结直肠癌肿瘤中AHNAK表达强度与临床病理之间的相关性,结果表明年龄、性别、肿瘤位置与AHNAK表达强度无明显相关性(p>0.05),AHNAK在高分化、中分化、低分化癌中的阳性表达率分别为2/8、9/13、15/17,统计学差异(p<0.05)提示肿瘤分化程度越低则AHNAK表达阳性率越高。7、通过HE染色观察肝转移癌组织结构,对比正常肝组织,转移癌中腺体结构紊乱,异形型明显。通过免疫组化染色及临床病理资料对比分析AHNAK在肝转移癌组织中的表达率。通过数据分析,结果表明,AHNAK蛋白在癌组织中高表达,而在正常组织中不表达。8、同时,分析AHNAK表达与结直肠癌肝转移之间的病理相关性,结果表明,结直肠癌肝转移患者癌灶中AHNAK表达阳性率高于结直肠癌无肝转移患者(p<0.05),肝转移与否与分化程度、性别、肿瘤位置无明显相关性(p>0.05)。结论:AHNAK在结直肠癌组织中高表达;AHNAK与肿瘤组织中免疫细胞浸润高度相关;AHNAK在结直肠癌中的表达与多个参与肿瘤免疫的免疫检查点基因具有显著相关性;AHNAK蛋白在结肠癌及肝转移癌组织中高表达。