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目的：探讨胰岛素样生长因子-1受体抑制剂鬼臼苦素靶向治疗上皮性卵巢癌的作用及机制.
方法：(1)体外培养上皮性卵巢癌细胞系SKOV-3及其耐药系SKOV-3/DDP,采用体外药物敏感性试验观察鬼臼苦素、顺铂对这两种细胞系生长抑制作用,观察鬼臼苦素联合顺铂对这两种细胞系协同生长抑制作用;(2)采用体外药物敏感性试验观察鬼臼苦素联合胰岛素样生长因子-1对SKOV-3细胞系细胞生长的影响,分设5组:①无血清组,②鬼臼苦素组,③胰岛素样生长因子-1组,④鬼臼苦素+胰岛素样生长因子-1组,⑤正常对照组.(3)采用流式细胞术检测鬼臼苦素、顺铂引起这两种细胞系细胞周期的变化,使用Armexin V-FITC凋亡试剂盒检测鬼臼苦素、顺铂对这两种细胞系细胞凋亡和坏死率的影响:(4)采用Western印迹法观察鬼臼苦素、顺铂对这两种细胞系磷酸化胰岛素样生长因子-1受体表达的影响.
结果：(1)鬼臼苦素对SKOV-3及SKOV-3/DDP细胞系具有显著的生长抑制作用,这种抑制作用具有浓度依赖性,浓度较低时(约0.01uM-0.5uM)时即对这两种细胞系具有显著的生长抑制作用,但是剂量再增加时这种生长抑制作用不再明显增加,即这两种细胞系对低浓度鬼臼苦素更为敏感.鬼臼苦素对这两种细胞系的IC50分别为0.71uM和0.82uM.顺铂对SKOV-3细胞系具有显著的生长抑制作用,这种抑制作用具有浓度依赖性,其IC50为9.86uM,而顺铂对SKOV-3/DDP细胞系的生长没有抑制作用.(2)鬼臼苦素联合顺铂对这两种细胞系具有协同生长抑制作用,这种协同作用尤其是在使用小剂量鬼臼苦素和顺铂时较敏感.(3)鬼臼苦素联合胰岛素样生长因子-1对SKOV-3细胞系细胞生长的影响:无血清组、鬼臼苦素组和胰岛素样生长因子-1+鬼臼苦素组的细胞生长均受到抑制,而胰岛素样生长因子-1组细胞生长增强.(4)鬼臼苦素使细胞系SKOV-3及SKOV-3/DDP细胞周期阻滞于G<,2>/M期,对照组及顺铂组无此现象,并且鬼臼苦素使这两种细胞凋亡和坏死率均显著提高,顺铂仅使SKOV-3细胞凋亡和坏死率提高,而对SKOV-3/DDP细胞没有影响.(5)胰岛素样生长因子-1能促进SKOV-3及SKOV-3/DDP细胞系磷酸化胰岛素样生长因子-1受体表达,当胰岛素样生长因子-1与鬼臼苦素联用时,随着鬼臼苦素浓度的增加,磷酸化胰岛素样生长因子-1受体表达逐渐降低.(6)随着浓度增加,鬼臼苦素使SKOV-3及SKOV-3/DDP细胞系磷酸化胰岛素样生长因子-1受体表达水平逐渐降低,并与鬼臼苦素对这两种细胞的生长抑制率显著相关.顺铂对SKOV-3细胞系磷酸化胰岛素样生长因子-1受体表达没有影响.
结论：(1)鬼臼苦素不但对SKOV-3细胞系,而且对其顺铂耐药系SKOV-3/DDP同样具有生长抑制作用,并且这种生长抑制作用与这两种细胞系磷酸化胰岛素样生长因子-1受体表达水平显著相关,提示鬼臼苦素能通过抑制胰岛素样生长因子-1受体磷酸化来抑制肿瘤细胞的生长.(2).鬼臼苦素对SKOV-3及SKOV-3/DDP胞系细胞的生长抑制作用主要是引起细胞周期阻滞,导致细胞凋亡和坏死.(3)鬼臼苦素联用顺铂对SKOV-3及SKOV-3/DDP细胞系具有协同生长抑制作用,这种协同作用尤其是在使用小剂量鬼臼苦素和顺铂时较敏感,表明鬼臼苦素能增加SKOV-3及SKOV-3/DDP细胞系对顺铂的敏感性,联合用药时,达到相同疗效的情况下,可以减少化疗药物的用量.(4)鬼臼苦素能够拮抗胰岛素样生长因子-1促肿瘤细胞生长作用,同时还能拮抗胰岛素样生长因子-1促肿瘤细胞胰岛素样生长因子-1受体磷酸化作用,这进一步证明了鬼臼苦素可以通过抑制胰岛素样生长因子-1受体磷酸化来抑制肿瘤细胞的生长,与肿瘤细胞是否耐药无关.