小沼兰植物内生细菌多样性及促生作用

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小沼兰是新近发现的兰科沼兰属的植物,生长环境是严苛的岩生条件。本文以小沼兰内生细菌作为材料,利用LB、DN和NFB三种培养基从小沼兰中分离到57个菌株,通过IS指纹图谱聚类和生理生化实验,将小沼兰植物内生细菌聚类成15个类群,Klebsiella pneumoniae subsp.Ozaenae、Paenalcaligenes、Paenalcaligenes suwonensis、Serratia marcescens subsp.marcescens、Providencia vermicola、Phytobacter diazotrophicus、Providencia rettgeri、Proteus terrae、Proteus mirabilis、Bacillus zhangzhouensis、Bacillus altitudinis、Pseudomonas geniculata、Bacillus velezensis、Klebsiella quasipneumoniae subsp.quasipneumoniae、Bacillus megaterium,体现了小沼兰植物内生细菌的物种多样性。通过对15个类群的代表菌株进行乙炔还原法测固氮酶活性,产生长素能力,溶磷能力,解钾能力,产铁载体能力等促生特性实验,实验表明:其中有5个菌株具有固氮酶活性,固氮酶活性在192.63~497.40 nmol/(m L?h)的范围内,类群XIV的代表菌株XN51的固氮酶活性最高,为497.40 nmol/(m L?h);其中12个菌株具有分泌生长素的能力,产生长素的能力在9.22~31.31mg/L范围内,类群XIII的代表菌株XN50的产生长素能力最高,为31.31 mg/L;其中6个菌株具有溶磷能力,溶磷的能力在9.10~38.93 mg/L的范围内,类群X的代表菌株XD28的解钾能力最高,为38.93 mg/L;其中8个菌株具有解钾能力,解钾的能力在23.56~51.34 mg/L的范围内,类群Ⅳ的代表菌株XL10的解钾能力最高,为51.34 mg/L;其中11个菌株具有分泌铁载体的能力。由此可见15个小沼兰植物内生菌类群的代表菌株,在功能上存在差异性,且具有相同功能的菌株,能力也存在差异性,表明小沼兰植物内生细菌功能多样性。对15个类群的生理生化特性和促生长特性进行综合分析,选取类群Ⅰ的代表菌株XL1、选取类群Ⅴ的代表菌株XL11,类群Ⅵ的代表菌株XL15和类群XIV的代表菌株XN51进行油菜促生盆栽实验。实验结果表明施加高效促生菌的油菜比对照组其中Klebsiella pneumoniae subsp.ozaenae和Phytobacter diazotrophicus具有溶磷解钾、产铁载体、产生长素和固氮能力,是综合功能较为全面菌株,可作为兰科沼兰属的生物肥料和促生菌的潜在资源,为兰科沼兰属的植物生物培肥提供了新的资源。油菜促生长试验结果显示:XL15和XL11对油菜的促生效果极其显著。其中菌株XL15促进油菜株高增加20.51%,根茎粗增加23.00%,干重增加49.54%,鲜重增加45.41%;菌株XL11促进油菜株高增加19.43%,根茎粗增加18.2%,干重增加41.07%,鲜重增加35.06%。小沼兰植物内生细菌对油菜促生效果是:XL15>XL11>XN51>XL1。因此XL15和XL11可以考虑作为潜在的促生菌株加以开发利用。
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