【摘 要】
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目的:有关心血管疾病的基础研究中,证实闰盘相关基因Z0-1在心肌不同病理情况下有不同的改变,并与已明确同心肌电生理相关的Cx43分子存在相互作用。本实验欲构建猪Z0-1基因的重
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目的:有关心血管疾病的基础研究中,证实闰盘相关基因Z0-1在心肌不同病理情况下有不同的改变,并与已明确同心肌电生理相关的Cx43分子存在相互作用。本实验欲构建猪Z0-1基因的重组慢病毒表达载体,用其病毒液感染猪iPS细胞,以获得携带该目的基因的猪iPS细胞。方法:分析Genbank的猪Z0-1mRNA序列,设计分别含有BamHI、SalI酶切位点的Z0-1基因上下游引物,PCR扩增该基因,将其连接入载体,构建Lenti-EF1α-EGFP-TRE-Z01重组慢病毒表达载体,挑选正确的克隆进行测序鉴定。在此基础上,使用慢病毒包装质粒pVSVG、质粒delta8.91和Fugene转染试剂一同转染293T细胞,获得病毒液,检测病毒滴度,感染猪iPS细胞。结果:成功构建了含有猪Z0-1基因的重组表达载体,通过酶切鉴定及测序鉴定证明结果与所设计序列相同。并成功包装出慢病毒,获得滴度为1.42*108IU/ml的病毒液,成功感染猪iPS细胞。结论:本课题成功构建慢病毒载体Lenti-EF1α-EGFP-TRE-Z01,及滴度为1.42*108IU/ml的病毒液感染猪iPS细胞,为研究Z0-1的基因功能及后续动物体内实验奠定了良好基础,有利于认识其在不同心肌病理状态下所发挥的独特作用,为心血管疾病的治疗打开新的大门。
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