杂质检查是药物的安全性检查项目之一。叶酸可预防婴幼儿神经管缺陷,作为孕妇服用的药物,其杂质谱的研究尤为关键。通过分析叶酸及叶酸片的杂质谱,鉴定非工艺带入的叶酸残留溶剂,完善其质量控制。第一部分比较各国药典中叶酸的有关物质分析方法,重点考察ChP 2015与EP 8.0。优化ChP 2015色谱条件,并完成分析方法学验证。对现行ChP 2015方法,建议控制柱温,并将对氨基苯甲酰谷氨酸列为特殊杂质进行检查,并控制其与蝶酸的分离度,提高方法专属性,同时改进叶酸片供试品溶液的制备方法。第二部分采用改进后有关物质检查方法,以2个厂家7个批次叶酸,4个厂家10个批次叶酸片的有关物质检测结果为依据,考察杂质谱情况,同时分析叶酸影响因素试验样品和叶酸及片剂长期试验样品,从有关物质方面对质量进行评价。整体上,叶酸杂质控制水平良好,杂质谱较稳定。不同厂家叶酸片的杂质谱略有差异,且比原料药杂质更大,推测制剂工艺是影响叶酸片质量的关键因素。对各杂质溯源,杂质C、D、E、F、Ⅱ、Ⅳ为工艺杂质;杂质Ⅲ为碱降解杂质;杂质A、Ⅰ既为工艺杂质,也为降解杂质。第三部分优化液质联用技术条件,采用LC-MS/MS法分离鉴定叶酸的工艺杂质及氧化、碱破坏降解产物,推测未知杂质的可能结构,并探讨其裂解规律。推测杂质Ⅰ为蝶呤-6-羧酸,属于蝶呤类化合物,与癌症有一定的关联,需对其严格控制;杂质Ⅱ为(L-谷氨酸,N-[4-[(2-氨基-3,4-二氢-4-氧代-6-蝶啶基)甲基氨基]苯甲酰基]-L-γ-谷氨酸)。第四部分建立反相高效液相色谱法,考察分析方法的专属性、线性、精密度、定量限、检测限和稳定性,用于测定叶酸的光学异构体含量,为叶酸的质量控制提供了支持。第五部分建立了顶空进样气相色谱法分析叶酸残留溶剂的方法,并鉴定了非工艺带入的未知残留溶剂。该残留溶剂为设备清洗溶剂乙醇。建议设备清洗验证,样品中不得检出乙醇。