【摘 要】
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过敏性哮喘（Allergic Asthma,AA）是一种慢性气道炎症性疾病,主要以EOS等炎症细胞浸润为主,主要表现为气道高反应、气道炎症以及气道黏液分泌增加。有研究表明,蠕虫在调节宿主免疫应答方面具有巨大的潜力,利用蠕虫的排泄分泌抗原（Excretion of secretory antigen,ES）或者衍生蛋白来代替活体治疗过敏性哮喘,开发新的治疗过敏性哮喘方法至关重要。本研究选取旋毛虫（T
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过敏性哮喘（Allergic Asthma,AA）是一种慢性气道炎症性疾病,主要以EOS等炎症细胞浸润为主,主要表现为气道高反应、气道炎症以及气道黏液分泌增加。有研究表明,蠕虫在调节宿主免疫应答方面具有巨大的潜力,利用蠕虫的排泄分泌抗原（Excretion of secretory antigen,ES）或者衍生蛋白来代替活体治疗过敏性哮喘,开发新的治疗过敏性哮喘方法至关重要。本研究选取旋毛虫（Trichinella spiralis,T.spiralis）ES P43、P49、P53作为研究对象,进一步分析其对卵清蛋白（Ovalbumin,OVA）诱导的过敏性哮喘的干预效应及潜在的免疫学机制,从而为开发新的有效的治疗过敏性哮喘的蠕虫衍生蛋白/药物奠定研究基础。本研究使用36只6-8周龄BALB/c雌性小鼠,均为SPF级。随机分为6组,空白对照组,过敏性哮喘组,P43干预组,P49干预组,P53干预组,联合干预组（P43+P49+P53）。每7 d记录体重和激发后各组小鼠行为变化,对小鼠身体状况进行评估;收集（Bronchoalveolar lavage fluid,BALF）并进行瑞氏吉姆萨（Wright-Giemsa）染色分析炎症细胞浸润数目情况;取肺部组织分别做苏木精-伊红染色法（Hematoxylin-Eosin staining,HE）和PAS染色法（Periodic Acid-Schiff stain,PAS）病理切片,观察炎症细胞浸润和气道黏液分泌情况;利用双抗体夹心法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA）检测小鼠血清中OVA-Ig E、OVA-Ig G1、OVA-Ig G2a、IL-4、IL-10、IFN-γ、TGF-β的含量及肺泡灌洗液IL-4、IL-10、IFN-γ、TGF-β含量,分析炎症因子在哮喘发病过程中表达情况;利用荧光定量PCR（q PCR）、免疫印迹（Western Blotting,WB）、免疫组化（Immunohistochemistry,IHC）检测T-bet和GATA-3的表达量变化情况,分析Th1/Th2型免疫分化方向;流式细胞术（Flow Cyto Metry,FCM）分析各组小鼠脾脏单细胞悬液CD4+、CD8+细胞在哮喘发病过程中分化情况。经P43、P49、P53单独干预和联合干预后,小鼠在激发后体重下降缓慢,各组小鼠行为学评分过程中,偶尔出现打喷嚏、呼吸平缓等症状,小鼠肺部炎症细胞数显著下降,气管周围只有少量的炎症细胞,基底膜较薄,支气管壁可见少量的深染杯状细胞增生,有微黏液分泌,杯状细胞黏液分泌面积显著降低,哮喘小鼠血清和BALF中IL-4、OVA-Ig E和OVA-Ig G1的含量都显著下降,IFN-γ、TGF-β、IL-10、OVA-Ig G2a的含量却显著性升高,并且联合干预组的效果要比单独干预组显著;WB和q PCR结果表明,经P43、P49、P53单独干预和联合干预后,哮喘组小鼠T-bet表达量升高但是低于对照组的表达量,GATA-3的表达量降低但是高于对照组的表达量,IHC同样表明,T-bet表达强度和表达范围明显增加,GATA-3表达强度降低,表达范围也减少,总体来说,联合干预组要比单独干预组干预哮喘发病进程效果好;FCM结果分析表明哮喘组CD4+/CD8+T细胞的比值较对照组显著升高,经P43、P49、P53单独干预和联合干预,CD4+/CD8+T细胞的比值显著下降。综上所述,本研究表明重组旋毛虫ES对过敏性哮喘具有一定的干预效果,旋毛虫ES抗原可减少炎症细胞的浸润以及气道黏液的分泌,可调控相关细胞因子、转录因子并逆转Th1/Th2细胞比例失衡以及调节CD4+/CD8+细胞的分化方向,参与抑制过敏性哮喘小鼠炎症症状。因此,本研究结果可以为开发新的有效的蠕虫衍生药物提供一定的理论依据。
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