量子点电化学、电化学发光共振能量转移及磁球修饰Ru(bpy)32+的电化学发光分析方法

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第一章中,我们通过示差脉冲伏安法研究了水溶液中巯基丙酸为配体的CdTe量子点的电化学性质,得到了三个电化学氧化过程(Al:0.36 V;A2:0.68V;A3:0.84V),并发现其中第一个电化学过程会被金属离子Mg2+选择性的抑制,基于此建立了一种具有良好重现性的检测Mg2+的电化学传感器,检测线性范围为4.00×10-5mol/L~2.00×10-2mol/L。第二章中,我们引入电化学发光作为供体光源研究了一种新的共振能量转移体系-电化学发光共振能量转移体系(ECRET)。电化学发光试剂鲁米诺在过氧化氢存在的条件下,通过电化学反应发出中心波长为425nm的蓝色光充当能量供体;另外,选择最大发射峰为655nm的红色荧光量子点作为能量受体。当向电极上施加一电位时,电化学发光供体将能量转移给量子点受体,产生高效的电化学发光共振能量转移。ECRET技术可被应用于研究蛋白质和核酸等生物分子间的相互作用,免疫分析及DNA分析。第三章中,我们以Ru(bpy)2(dcbpy)NHS作为ECL标记物,将电化学发光DNA分析法和磁球放大技术及碳纳米管增强技术相结合,发展了一种超灵敏的检测DNA的电化学发光检测方法。该法中亚微米磁球表面因为修饰了大量的发光体分子而起到信号放大的作用;碳纳米管作为辅助电极材料,增加了发光体分子与电极的接触面积,进一步放大信号。实验中我们利用捕捉探针上修饰的生物素与微孔板基底上的链酶亲和素的反应将捕捉探针固定在基底表面,然后经DNA杂交反应、生物素与链霉亲和素的特异性反应等最终形成磁球-检测DNA-目标DNA-捕捉DNA三明治式复合物,然后进行解离。利用Ru(bpy)2(dcbpy)NHS上的酯基与磁球上的链霉亲和素之间的结合反应将ECL标记物标记到磁球表面,实验时将修饰了ECL标记物的磁球与碳纳米管混合再用磁铁固定到Au电极表面。在三丙胺存在的条件下进行ECL检测,在1.35V得到最大的电化学发光强度(Im,ECL)。利用Im,ECL,我们可以实现对DNA的检测。利用链霉亲和素修饰的磁球(SA-SMBs)可以增加一个目标分子对应的Ru(bpy)32+分子的数量;利用CNTs包埋Ru(bpy)32+-NHS-SA-SMBs来增加Ru(bpy)32+分子与电极的接触面积这两步放大作用,最终大大提高了Ru(bpy)32+分子的电化学氧化得到的第二个ECL波,从而提高了检测方法的灵敏度。利用这种方法,我们实现了对DNA的检测,线性范围为3.00×10-16 mol/L~1.00×10-13mol/L。
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