LncRNA HOXB-AS3抑制p53表达促进肝癌生长机制研究

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong483
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目的:
  探讨IncRNAHOXB-AS3促进肝癌细胞生长的作用及机制。
  材料和方法:
  本研究收集了温州医科大学附属第二医院2012年7月至2017年8月期间收治的36例诊断为肝细胞癌并接受手术切除患者的新鲜肝癌组织及周边正常邻近组织。通过实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测HOXB-AS3在肝细胞癌肿瘤组织和邻近正常组织中的含量表达,并分析HOXB-AS3与肿瘤组织表达之间的关系。通过平板克隆实验和流式细胞术检测HOXB-AS3和p53对肝癌细胞增殖,凋亡以及细胞周期的影响。通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)和染色质免疫沉淀(ChIP)实验分别检测HOXB-AS3和DNMT1之间的结合关系以及DNMT1对p53的调节机制。免疫印迹试验(Westernblot)用于检测敲低HOXB-AS3后肝癌组织中p53的表达。最后通过流式细胞术和平板克隆实验来检测p53对肝癌细胞增殖的调节作用。
  结果:
  实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)结果显示,HOXB-AS3在肝癌患者肿瘤组织中的含量表达明显高于癌旁正常组织。而且HOXB-AS3在III期和IV期患者中的表达显著高于I期和II期。在包括Hep3B和LM3在内的肝癌细胞系中敲低HOXB-AS3的表达可以抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,并诱导细胞周期停滞在G0/G1期。RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)和染色质免疫沉淀(ChIP)实验结果表明,HOXB-AS3可以通过与DNMT1结合从而抑制p53的表达,在Hep3B细胞系中p53的过度表达可以部分逆转HOXB-AS3诱导的细胞增殖作用。
  结论:
  高表达HOXB-AS3可促进肝癌细胞的增殖并抑制其细胞凋亡,其机制可能与HOXB-AS3通过与DNMT1结合在p53表达中的调节作用有关。
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