目的:通过对百日咳疫苗制备过程中各关键参数的调控,来提高无细胞百日咳疫苗的安全性和有效性。实验方法:(1)用发酵罐培养I相菌CS菌株。(2)全培养物经两次饱和硫酸胺盐析,并经PBS溶液浸出抗原;再经蔗糖密度梯度离心,去内毒素。(3)纯化后的原液用戊二醛对抗原进行解毒,透析后去除游离戊二醛;最后加入氢氧化铝和白喉、破伤风类毒素制成DTaP。(4)生物学检定,进行小鼠体重增加和白细胞增多试验、组织胺致敏试验及效价试验。结果:(1)通过发酵罐培养I相菌C5菌株获取目的蛋白产物。(2)通过两次饱和硫酸胺盐析,并经PBS溶液浸出来纯化抗原,经蔗糖密度梯度离心,去内毒素。(3)纯化后的原液用戊二醛对抗原进行解毒使PT的空间结构发生改变,进而使PT丧失对人体的毒性但不破坏其免疫原性。(4)通过生物学检定,对百日咳疫苗的有效性及安全性进行评价。结论:APV是组分疫苗,去除和减少了它的毒性(主要是内毒素)和反应原性(主要是致敏物质),从而降低了不良反应。因此生产出安全有效的百日咳疫苗对预防百日咳流行病的传播具有非常重要的意义。