第一部分:肿瘤-间质比例是进展期胃癌的一项预后指标目的:胃癌的发生发展是癌细胞与肿瘤微环境协同演化的结果,其潜在的分子病理机制尚需深入研究。该部分研究聚焦于胃癌微环境的大体形态学分析,旨在分析肿瘤-间质比例(tumor stromal ratio,TSR)的预后价值。方法:低倍镜下(100×)观察494例胃癌患者的苏木素-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色切片,每例选取符合标准(视野内四周均出现癌巢或癌细胞)的区域采集5张HE图片,并定量分析相应的TSR数据。结合胃癌患者随访数据库,进一步分析TSR与主要临床病理特征的相关性,主要包括:肿瘤类型、组织学分级、浸润深度、淋巴结转移数目、TNM分期等。通过Kaplan-Meier生存分析评估TSR与总体生存期(overall survival,OS)的相关性。结果:根据TSR临界值=0.50,将胃癌病例分为TSR-低值组(n = 254,51.4%)和TSR高值组(n = 240,48.6%)。K-M生存曲线提示两组OS差异显著(Log-rank检验,x2 = 25.566,P<0.0001),TSR-高值组预后较差。结论:TSR是胃癌微环境内的一项独立预后指标。基于肿瘤微环境的概念框架,进一步分析具有临床价值的重要指标有助于全面认知胃癌侵袭转移的病理机制。第二部分:人网膜乳斑内免疫微环境的探索性研究目的:以胃癌腹膜转移的微单元乳斑为研究对象,分析腹膜癌网膜标本中乳斑的形态学特征,在此基础上探索性研究胃癌微环境内的重要细胞构成。方法:采用HE染色以及免疫组化SP法研究腹膜癌病人大网膜病理切片,分析乳斑形态学特征,定量分析其细胞总数和细胞构成比例,总结乳斑的特征参数,重点研究其免疫细胞构成比。结果:乳斑的形态多样,主要形态有四种:圆形(14.5%)、椭圆形(18.0%)、脂肪内不规则形(14.0%)和血管周环形(11.5%);每个乳斑的周长中位数为2752(范围817～7753)像素。免疫细胞是乳斑的主要细胞成分,每个乳斑内免疫细胞中位数为141(范围43～650)个,集中分布在50～150个(占43.5%);免疫组化定量分析提示免疫细胞的主要成分依次为:T淋巴细胞(46.1%)、B淋巴细胞(28.4%)、巨噬细胞(12.4%)和其他免疫细胞(13.1%);乳斑内血管丰富,微血管中位数为4(范围0～13)个。间皮细胞排列疏松,中位数为5(范围0～51)个,缺少间皮细胞覆盖的乳斑为38.1%。在胃癌和结直肠癌病人大网膜中,乳斑免疫细胞总数、周长、微血管数、间皮细胞数、T细胞数、巨噬细胞数的差异无统计学意义(P>0.05),B细胞数的差异有统计学意义(P<0.001)。结论:乳斑是胃癌腹膜转移发生发展的结构基础,分析其形态结构和细胞组成有助于深入认识胃癌转移的病理机制。乳斑免疫微环境内重要细胞构成包括淋巴细胞以及巨噬细胞。第三部分:肿瘤浸润淋巴细胞比例在胃癌的预后价值研究目的:研究表明肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TIL)与胃癌进展密切相关,但分析指标各异,本研究拟探索临床便捷性、创新性TIL诊断指标。方法:通过HE染色半定量分析481例胃癌间质内肿瘤浸润淋巴细胞比例(the percentage of stromal TIL,psTIL),psTIL数据获取流程概括为:①低倍镜下(100×)选取观察区域;②高倍镜下(200×或400×)获取HE图片;③截取肿瘤间质区域,按照psTIL=(间质内TIL面积/间质区总面积)×100%的公式获取psTIL数据,进一步研究psTIL指标与胃癌病例主要临床病理特征以及总体生存期(OS)的相关性。结果:根据psTIL中位值10.0%将胃癌病例分为psTIL-低值组(n = 269,55.9%)和psTIL-高值组(n = 212,44.1%)。高psTIL与胃癌无浆膜侵袭、较早的分期以及较好的预后相关(P<0.05)。通过单因素分析(HR:0.734,P= 0.047)以及多因素分析(HR:0.722,P= 0.030)结果均显示,高psTIL是良好的预后指标。Kaplan-Meier生存曲线提示psTIL-高值组胃癌患者的OS显著高于psTIL-低值组(P = 0.030)。ROC分析提示psTIL的预后预测价值良好(Area under the curve:0.432[95%CI:0.380-0.484],P=0.012)结论:基于HE染色分析胃癌中psTIL值有助于胃癌的预后预测,胃癌间质内大量浸润淋巴细胞提示预后较好。第四部分:肿瘤相关巨噬细胞与胃癌预后的相关性研究目的:作为胃癌免疫微环境中的重要指标,肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAM)与胃癌预后的相关性尚需要进一步深入分析。方法:通过常规免疫组织化学染色研究组织芯片中494例胃癌患者TAM的数目以及分布位置,进一步分析TAM的分布类型特征。根据胃癌癌巢与胃癌间质的空间位置关系,探讨TAM数目计算方法的可行性,主要包括癌巢内巨噬细胞(macrophages in cancer nest,MC)、侵袭前沿处巨噬细胞(macrophages in invasive front,MF)以及间质内巨噬细胞(macrophages in stroma,MS)。进一步分析TAM数目、分布类型与胃癌患者临床病理特征、OS的相关性。结果:胃癌组织内浸润巨噬细胞数目显著高于癌旁组织(P<0.001)。TAM数目与胃癌OS的相关性不大。能同时研究MC、MF和MS的胃癌共296例,主要病例信息与494例整体信息无显著差异。根据不同区域TAM数目的相对多少,将胃癌TAM的分布类型总结为2种:MC主导性(n = 128,43.2%)以及MF/MS主导型(n= 168,56.8%)。TAM分布类型与胃癌组织学分级显著相关(P=0.001)。MF/MS主导型胃癌病例的中位OS(46.7月,95%CI:40.1～53.3月),显著低于MC主导型胃癌病例的中位OS(66.6月,95%CI:58.3～74.9月)(P = 0.002)。通过ROC分析提示TAM分布类型这一指标的预测价值优于组织学分级、是否出现远处转移,但弱于pN分期以及TNM分期。结论:TAM分布类型优于TAM数目,是胃癌OS相关的一项独立预后指标,MF/MS主导型的胃癌病例预后差。