探究雌激素对肾缺血再灌注损伤后肾间质纤维化的影响

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目的:研究雌激素是否通过调控TGF-β1表达来改善肾缺血-再灌注损伤后肾间质纤维化的程度,从而进一步探讨雌激素对肾缺血-再灌注损伤发挥保护作用的可能机制。方法:(1)将提前两周给予去除卵巢预处理的32只雌性SD大鼠,随机均分为四组(8只/组),分别为:不给予干预的正常组(Control组),只暴露肾脏不给予肾缺血的假手术组(Sham组),完成整个造模的肾缺血-再灌注损伤组(I/R组)及造模完成前给予雌激素皮下注射的雌激素干预组(E2+I/R组)。Control组:不给予处理,常规饲养。Sham组:常规麻醉后,将右侧肾脏完整切除,完全暴露左侧肾脏,但不给予无创血管夹夹闭左侧肾蒂,等待45分钟并给予盐水湿润纱布覆盖后暴露出来的左侧肾脏,倒计时结束后将左侧肾脏还纳,给予切口丝线逐层缝合并用碘伏在次擦拭切口。I/R组:等待大鼠完全进入麻醉状态后后,先摘下右侧肾脏,分离左肾肾蒂周围脂肪组织,使用无损伤血管夹延横向完全夹闭左侧肾蒂,在45分钟后松开血管夹,等待肾脏颜色恢复,证明血流再灌注成功,逐层缝合后关闭腹腔并给予碘伏擦拭切口。E2+I/R组:在造模开始的三天前,在大鼠大腿内侧经皮下注射给予雌激素(100微升/公斤)。连续注射3天,每天固定时间给予一次,剩余步骤参考上一组造模方法。各组大鼠完成上述操作后再常规饲养14天后,常规处死后将右侧肾脏完整取出,为避免损伤肾组织,摘除过程中钝性分离并使用玻璃分针。(2)苏木素-伊红(HE)染色观察肾小管损伤并性数据分析。(3)Masson染色组织经过固定液处理后,给予乙醇脱水,石蜡包埋后切片,石蜡切片给予马松染色处理,最后光镜下观察每组肾纤维化改变情况。(3)Western-blot检测每组肾间质中TGF-β1蛋白上调或者下降与否。结果:(1)HE显示I/R组显现明显病理损伤,出现肾小球萎缩,肾小管出现肿胀、坏死及细胞脱落,管腔大小明显改变、肾间质出现了病理变化,Paller评分与Control组和Sham组相比较明显升高(P<0.05);反而再观察E2+I/R组时可以看到肾小球结构无明显改变,肾小管上皮细胞、肾间质、炎性细胞浸润较I/R组轻,Paller评分较I/R组低(P<0.05)。(2)通过Masson染色实验表明I/R组间质纤维化明显;E2+I/R组纤维化较前者明显缓解。(3)雌激素可降低肾缺血-再灌注损伤后肾间质中TGF-β1蛋白的表达,肾I/R组肾脏中TGF-β1的表达较Control组有明显上调(P<0.05)。E2+I/R组肾脏中TGF-β1蛋白的表达水平较I/R组有明显下调(P<0.05)。结论:雌激素可能通过下调大鼠模型肾间质中TGF-β1的表达,改善肾小管间质纤维化的程度,从而发挥对肾缺血-再灌注损伤后的保护作用。
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