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目的:探讨miRNA-141对结肠癌细胞增殖及侵袭转移的影响和作用机制,并在细胞水平研究其与化疗药联合应用后治疗结肠癌的效果。方法:1在结肠癌细胞中转染miRNA-141后应用qPCR法检测转染效率。2采用MTS实验方法检测过表达和敲低miRNA-141对结肠癌细胞增殖活性的影响。3采用Transwell Matrigel侵袭实验检测过表达和敲低miRNA-141后对结肠癌细胞侵袭能力的影响。4采用划痕愈合实验检测过表达和敲低miRNA-141对结肠癌细胞迁移能力的影响。5采用qPCR方法检测过表达和敲低miRNA-141后对结肠癌细胞MAP4K4基因的表达的影响。6采用Western blotting法检测过表达和敲低miRNA-141对结肠癌细胞MAP4K4蛋白的表达水平的影响。7采用qPCR方法分别检测奥沙利铂(终浓度分别为25、12.5、0mg/l)或氟尿嘧啶(浓度分别为25、12.5、0mg/l)处理HCT-116和HCT-8两种结肠癌细胞后,对结肠癌细胞miRNA-141的表达水平的影响。8采用RT-PCR方法检测药物处理两种结肠癌细胞后的MAP4K4基因表达的变化。9采用MTS方法检测上述浓度药物处理两种结肠癌细胞后其增殖活性的改变。10应用Transwell Matrigel侵袭实验检测单独过表达miRNA-141和分别联合奥沙利铂和氟尿嘧啶后对结肠癌细胞侵袭能力的影响。11采用划痕愈合实验检测单独过表达miRNA-141和分别联合奥沙利铂和氟尿嘧啶后对结肠癌细胞迁移能力的影响。12采用RT-PCR方法分别检测单独过表达miRNA-141和联合奥沙利铂(12.5mg/l)和氟尿嘧啶(12.5mg/l)后对结肠癌细胞MAP4K4基因表达的影响。13采用Western blotting法分别检测单独过表达miRNA-141和分别联合氟尿嘧啶和奥沙利铂后MAP4K4蛋白的表达情况结果:1 qPCR结果表明,转染miRNA-141mimics的结肠癌细胞miRNA-141表达升高(P<0.05),转染miRNA-141 inhibitor的结肠癌细胞miRNA-141表达降低(P<0.05)。2 MTS结果表明,过表达miRNA-141抑制结肠癌细胞的增殖活性(P<0.05),敲低miRNA-141后促进结肠癌细胞的增殖活性(P<0.05)。3 Transwell Matrigel侵袭实验表明,过表达miRNA-141抑制结肠癌细胞的侵袭能力(P<0.05),敲低miRNA-141后促进结肠癌细胞的侵袭能力(P<0.05)。4划痕愈合实验结果表明,过表达miRNA-141抑制结肠癌细胞的愈合能力(P<0.05),敲低miRNA-141后促进结肠癌的愈合能力(P<0.05)5 qPCR结果表明,过表达miRNA-141的结肠癌细胞中,MAP4K4表达降低(P<0.05),敲低miRNA-141后MAP4K4表达升高(P<0.05)。6 Western blotting结果表明,过表达miRNA-141的结肠癌细胞,其MAP4K4蛋白表达水平降低(P<0.05),敲低miRNA-141后MAP4K4表达水平升高(P<0.05)。7 qPCR结果揭示,与未加药组相比,加奥沙利铂后HCT-116和HCT-8两种结肠癌细胞miRNA-141表达均不同程度升高且差异具有统计学意义(P<0.05),氟尿嘧啶处理HCT-116和HCT-8两种结肠癌细胞后其miRNA-141的表达均升高,且与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05),而且随着药物浓度增高表达均有增高趋势。8 RT-PCR结果表明,与未加药组相比,奥沙利铂或氟尿嘧啶处理的结肠癌细胞,其MAP4K4基因表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。9 MTS实验结果表明,与未加药组相比,氟尿嘧啶和奥沙利铂处理HCT-116和HCT-8两种结肠癌细胞后均能抑制其增殖活性,差异具有统计学意义(P<0.05),并且随着药物浓度增加增殖活性逐渐降低。10 Transwell Matrigel侵袭实验结果表明,与相对应对照组相比,单纯加药组,单独过表达miRNA-141和分别联合加奥沙利铂、氟尿嘧啶后细胞的侵袭能力均降低(P<0.05)。11划痕愈合实验结果表明,与过表达miRNA-141对照组比较,单纯加药组,单纯过表达miRNA-141和分别联合加氟尿嘧啶和奥沙利铂后,细胞的迁移能力均降低(P<0.05)。12 RT-PCR结果表明,与相对应的对照组相比,单独过表达miRNA-141和分别联合氟尿嘧啶、奥沙利铂后结肠癌细胞MAP4K4表达水平均降低(P<0.05)。13 Western blotting实验结果表明,与相应的对照组相比较,单纯加药,单独过表达miRNA-141和分别联合氟尿嘧啶、奥沙利铂后两种结肠癌细胞MAP4K4蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论:1结肠癌细胞过表达miRNA-141,其增殖、侵袭及迁移能力均受到抑制,miRNA-141在结肠癌中起着抑癌基因的作用。2结肠癌细胞过表达miRNA-141后,MAP4K4基因表达水平降低,表明MAP4K4是其靶基因,并且MAP4K4是结肠癌的致癌基因。3氟尿嘧啶和奥沙利铂处理HCT-116和HCT-8结肠癌细胞后,随着浓度的增加细胞增殖能力降低。4过表达miRNA-141分别联合氟尿嘧啶和奥沙利铂可以降低结肠癌细胞的侵袭和迁移能力。5化疗药物联合过表达miRNA-141处理结肠癌细胞后其MAP4K4基因及蛋白表达水平降低,且较单独处理组降低更明显,表明过表达miRNA-141和化疗药具有相似的抑制结肠癌的作用。6 miRNA-141/MAP4K4途径可以调控HCT-116和HCT-8结肠癌细胞对化疗药物的敏感性。