目的:肾病综合征的患者常伴有足细胞足突的缺失和融合,裂孔隔膜(slit diaphragm SD)是连接足细胞相邻足突的蛋白复合体,大量蛋白尿与正常足细胞和裂孔隔膜结构的破坏有很大关系。CD2AP(CD2 associated protein CD2AP)是位于裂孔隔膜的一种蛋白,参与细胞骨架的组装、细胞信号转导和足细胞凋亡等,是肾小球足细胞损伤的一个早期重要指标。Wilm肿瘤蛋白1(Wilms’tumor 1WT1)作为一种转录调节因子,在成人肾小球足细胞内持续表达,对维持正常的足细胞功能起着重要作用。本文采用免疫组化的方法检测CD2AP、WT1在成人原发性肾病综合征不同病理类型肾小球的表达,并分别分析其与临床指标(如24小时尿蛋白定量、血肌酐、肾小球硬化率)的关系。方法:(1)原发性肾病综合征患者80例,平均年龄(39.64±16.3岁),男50例,女30例。依据病理分型分为肾小球微小病变组(MCN),IgA肾病组(其中局灶增生硬化性IgA肾病8例,轻度系膜增生性IgA肾病11例,重度系膜增生性IgA肾病1例),膜性肾病组(其中Ⅰ期MN18例,Ⅱ期MN2例),局灶节段性肾小球硬化组(其中顶端型2例,脐部型2例,非特殊型16例),每组各20例。(2)正常对照组10例肾脏肿瘤切除术患者肿瘤远端正常肾组织,男5例,女5例。(3)实验组和正常对照组均在肾活检或肾切除前留取尿液和血清标本,测定24小时尿蛋白定量、血肌酐、血清白蛋白。(4)采用北航Motic Med6.0图像分析系统检测肾小球CD2AP及WT1的表达指数(EI),计数光镜下肾小球硬化率(光镜下硬化肾小球数/肾小球总数×100%)。(5)临床指标与实验数据用X±s表示,CD2AP及WT1在各组表达的比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK法。CD2AP、WT1与24小时尿蛋白定量、血肌酐、肾小球硬化率间采用直线相关分析。(6)采用SPSS16.0软件处理数据,以p<0.05代表有统计学意义。结果:1临床实验指标:对照组患者的24小时尿蛋白定量、血肌酐分别为:(0.04±0.02g/24h)、(69.90±5.88umol/L);肾小球微小病变组(MCN)、IgA肾病组(IgAN)、膜性肾病组(MN)、局灶节段肾小球硬化组(FSGS)的24小时尿蛋白定量分别为:(4.78±1.61 g/24h)、(5.55±1.86 g/24h)、(5.70±2.50 g/24h)、(4.54±1.63 g/24h);各组血肌酐水平为(76.43±16.85μmol/L)、(82.60±20.4μmol/L)、(78.10±22.46μmol/L)、(123.1±73.29μmol/L);各组硬化率分别为(3.41±6.22)%、(2.48±6.01)%、(2.51±3.80)%、(6.14±11.60)%。2.免疫组化结果:(1)CD2AP在对照组和肾病综合征各组的肾小球和部分肾小管上皮细胞刷状缘均有表达。在正常对照组CD2AP沿毛细血管壁呈均匀、线状分布。MCN组、MN组、FSGS组CD2AP沿毛细血管壁不均匀分布,呈细颗粒状,部分毛细血管壁表达缺失;IgAN组CD2AP表达不均呈断续不等颗粒状,在病变区域表达缺失。对照组CD2AP表达的EI值为(14.35±3.29),MCN组、IgAN组、MN组、FSGS组肾小球CD2AP表达的EI值分别为(11.69±3.36)、(11.84±4.37)、(7.67±3.06)、(8.71±3.06)。MN组和FSGS组与对照组比较显著降低(p<0.05);MCN组、IgAN组与对照组无显著差异;MN组及FSGS组显著低于MCN组、IgAN组(p<0.05)。(2)WT1在对照组肾小球内沿毛细血管壁呈均匀分布。MCN组、FSGS组WT1表达较均匀但强度减弱,IgAN组病变区域表达缺失。对照组WT1的EI值为(3.51±0.51),MCN组、IgAN组、MN组、FSGS组WT1的EI值为( 2.54±0.85 )、(2.45±0.57)、(3.71±1.08)、(1.93±0.31); MCN组、IgA组、FSGS组与对照组比有差异(p<0.05),表达明显降低,而MN与对照组比差异不明显。各个实验组之间无差异(p均>0.05)。3.免疫组化与临床指标相关性分析:原发性肾病综合征患者肾小球CD2AP的表达水平与24小时尿蛋白定量负相关(r=-0.861,p<0.05),与血肌酐、肾小球硬化率无相关性(r值分别为0.056、0.120,p均>0.05)。肾小球WT1的表达水平与24小时尿蛋白定量负相关(r=-0.304,p<0.05),与血肌酐、肾小球硬化率无相关性(r值分别为-0.256、-0.316,p均>0.05)。结论1.CD2AP特异表达于肾小球内足细胞,沿肾小球毛细血管壁,呈均匀、线状分布。原发性肾病综合征患者CD2AP在肾小球中不均匀分布,呈颗粒状,部分区域表达减弱或缺失。MN组和FSGS组与对照组比较显著降低,MCN组、IgAN组与对照组无显著差异;MN组及FSGS组显著低于MCN组、IgAN组。CD2AP的表达与24小时尿蛋白定量负相关,与血肌酐、肾小球硬化率无相关性。2. WT1在肾小球足细胞胞核及胞浆内表达,原发性肾病综合征患者MCN组、IgA组、FSGS组WT1表达与对照组比较表达明显降低,各组之间无差异。MN与对照组比较无明显差异。肾小球内WT1的表达水平与24小时尿蛋白定量负相关,与血肌酐、肾小球硬化率无相关性。