论文部分内容阅读
前言β1-肾上腺素能受体(β1-adrenergic receptor，β1-AR)属于G蛋白偶联受体(G-protein coupled receptor，GPCR)超家族，在血压调控上发挥着重要作用。目前，关于β1-AR基因多态性的研究热点主要集中在49S>G(145A/G)和389R>G(1165C/G)两个编码区单核苷酸多态性(coding-region single nucleotide polymorphism，cSNP)位点，但结论不一。迄今为止尚无49S>G和389R>G位点构成的单体型(SR、GR、SG、GG)与原发性高血压(essential hypertension，EH)的相关性报道，本研究的目的在于从单体型角度探讨β1-AR基因单体型与EH的相关性及其对受体活性影响。材料与方法1、从辽宁省高血压高发区彰武县人群中，选取高血压患者和健康对照共391人进行病例—对照研究。并统计分析β1-AR基因49S>G和389R>G构成的单体型SR、GR、SG、GG与EH的关联性。2、构建β1-AR基因四种单体型表达载体pcDNA3.1(+)-β1-AR，将其转染入COS7细胞，构建COS7稳定表达细胞株。3、检测β1-AR单体型稳定表达的COS7细胞内cAMP、肾素及钙离子的基础水平以及β1-AR激动剂异丙肾上腺素(isoprenaline，ISO)或去甲肾上腺素(norepinephrine，NE)和β-阻滞剂美托洛尔作用后的变化。结果1、在病例—对照人群中体重指数(body mass index，BMI)、血清甘油三酯(triglyceride，TG)、总胆固醇(total cholesterol，T-chol)和低密度脂蛋白(low-density lipoprotein，LDL)水平在EH组均明显高于对照组，而高密度脂蛋白(high-density lipoprotein，HDL)水平在EH组明显低于对照组(p<0.05)。因此，BMI、TG、T-chol和LDL为高血压发生的危险因素，而HDL是防止高血压发生的保护因素。2、应用ARLEQUIN软件分析，结果显示，β1-AR基因上49S>G和389R>G之间存在连锁不平衡(D’=0.843，r~2=0.262，p<0.0001)。其中，SG单体型为主要单体型(51.4％)，而GG单体型比例最低(2.0％)。3、β1-AR基因的GG单体型是EH的独立危险因素(OR=3.843，p=0.027)。GG单体型携带者的舒张压水平明显高于其他单体型携带者(92.94+3.55 vs．84.31±0.54mmHg，p=0.022)。4、基础状态下，细胞内的cAMP含量按GR>GG>SR>SG(33.44±1.18>27.98±1.17>25.12±0.94>20.08±1.19 pmol/mg)的顺序递减。经过刺激因素作用后，与含有389G的单体型细胞相比，ISO诱导的cAMP增加在含有389R的单体型细胞更为明显(SR 159.48％±21.35％，GR 99.86％±11.33％vs．SG 61.98％±1.54％，GG44.03％±4.99％，p<0.01)；美托洛尔作用的cAMP下降也是如此(SR 84.51±8.94％，GR 78.51±8.36％vs．SG 42.83±4.15％，GG 3.87±2.63％，p<0.05)。在四种单体型中，GG单体型细胞的cAMP变化最不明显。5、β1-AR经NE持续刺激后，SG单体型受体较GG单体型受体脱敏更完全(96.87％±0.89％vs．78.75％±2.96％，p<0.001)。6、基础状态下，GG单体型细胞肾素活性最高，而SG单体型细胞肾素活性最低(GG 9.37±0.32，GR 6.89±0.21，SR 6.62±0.26和SG 4.93±0.20 pg/μg/h)。与细胞内cAMP变化一致，经过β1-AR激动剂和阻滞剂作用后，肾素活性在含有389R的单体型细胞较含有389G的单体型细胞变化幅度更大(ISO：SR 68.48±5.04％，GR62.54％±5.69％vs．SG 35.97％3.13％，GG 20.98％±3.11％，p<0.01；美托洛尔：SR36.75％±3.84％，GR 33.97％±3.48％vs．SG 15.95％±2.86％，GG 1.63％±0.46％，p<0.01)。同样，在四种单体型中，GG单体型细胞肾素变化幅度最小。7、基础状态下，SG和GG单体型细胞内钙离子无明显差别。经ISO刺激20hr后，GG单体型细胞内的钙离子水平明显高于SG单体型细胞(372.29±24.33 vs．286.51±1.33nmol/L，P=0.017)。结论1、β1-AR基因49S>G和389R>G两个cSNP位点间存在连锁不平衡。在彰武县人群中，SG单体型为主要单体型，而GG单体型比例最低。2、与49S>G多态相比，389R>G多态对β1-AR活性的影响更大。3、GG单体型受体活性最低，脱敏能力差，对β1-AR激动剂和阻滞剂均不敏感。而携带有389R单体型的β1-AR受体活性较高，对刺激敏感。4、与其他β1-AR基因单体型携带者相比，GG单体型携带者高血压的患病风险增加。