寇氏隐甲藻(Crypthecodinium cohnii)培养生产DHA的研究

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DHA(二十二碳六烯酸)在婴幼儿大脑发育和视力发育中具有非常重要的生理作用,并且具有防治心血管疾病,提高人体免疫力和消炎、抗癌等功能。寇氏隐甲藻(Crypthecodinium cohnii)细胞油脂富含DHA,而其他多不饱和脂肪酸(PUFAs)含量较少,可以在添加了有机底物的培养基中异养生长,是人体补充DHA的良好来源。研究了温度和培养基的初始pH值对寇氏隐甲藻生长和油脂积累的影响。高温有利于细胞的生长,30℃发酵培养的生物量最大,达到25.25g/L;低温有利于油脂的积累,15℃条件下发酵,藻体内油脂含量达到40%。将整个发酵过程分为两个阶段,即28℃条件下培养5天,然后在22℃条件下再培养2天,油脂总产量达到8.28g/L,这种温度变化的两阶段发酵过程较恒温发酵油脂产量高。培养基的初始pH值在6.5~7.0时,生长速率最快,但油脂的积累对培养基的初始pH值的依赖性不是很强。对培养基中葡萄糖、味精和酵母膏进行优化,得到葡萄糖的最佳浓度为68g/L,味精的最佳浓度为30g/L,酵母膏的最佳浓度为6.5g/L。在最佳配方下,DHA的最终产量达到2.41g/L。测定了寇氏隐甲藻的生长代谢曲线。发酵7天后收集藻体较为合理。运用超声波法、生物酶法,反复冻溶法等方法,对寇氏隐甲藻进行了破壁研究。研究表明,这些方法都对寇氏隐甲藻都具有一定的破壁作用,尤以碱性蛋白酶效果为佳,破壁后油脂的提取率也有了不同程度的提高。把酶法破壁和超声波法破壁结合起来,在酶解5h后,再超声波1h,破壁率可高达91.7%,油脂提取率提高了21.7%,破壁效果更为理想。
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