论文部分内容阅读
第一部分家族性腺瘤性息肉病基因型与表型的研究背景:家族性腺瘤性息肉病是遗传性结直肠癌的一种,与APC和MUTYH基因突变有关。患者临床表型及疾病的严重程度与突变基因类型及突变基因位点有关。对FAP患者及其家系成员进行突变基因检测,对遗传咨询、长期监测随访、干预治疗及减少患者癌症发生率和降低死亡率至关重要。目前我国关于家族性腺瘤性息肉病患者基因型与表型关系的研究数据有限。目的:研究家族性腺瘤性息肉病患者基因型与表型关系。方法:通过第二代测序的方法对46名家族性腺瘤性息肉病先证者进行突变基因检测。同时收集所有先证者及家系成员的临床资料以评估基因型与表型的关系。结果:91.30%（42/46）的患者检测出基因突变,包括APC基因突变35例,MUTYH基因突变3例,APC和MUTYH双基因突变4例。28.57%（10/35）的APC基因突变为新发突变。在2名患者中检测出APC基因609密码子（c.18271831del）突变,携带此突变的患者存在严重的表型:1名患者在12岁即发现结直肠内超过1000枚腺瘤性息肉,另1名患者在25岁时诊断为CRC,其结直肠内息肉超过1000枚并合并胃窦多发腺瘤性息肉。3例患者检测出MUTYH基因突变,包括1例c.55C>T杂合性突变,1例c.55C>T纯合性突变和1例IVS10-2A>G杂合性突变。c.55C>T杂合突变和纯合突变携带者均表现为结直肠内超过100枚息肉,而且c.55C>T杂合突变携带者在50岁诊断为早期结肠癌。4例患者检测出了 APC和MUTYH双基因突变。对其中1名APC和MUTYH双基因突变患者的家系成员进行基因检测,在6名家系成员中检出了与先证者相同的APC（c.4055 T>C）和MUTYH（IVS10-2A>G）双基因突变。APC和MUTYH双基因突变遗传模式符合常染色体显性遗传,其携带者发病年龄与APC基因突变者相似,早于MUTYH基因突变者,但发生癌变时间较APC基因突变者晚。有56.52%（29/46）先证者有结肠外表现,最常见的为胃底腺息肉。MUTYH基因突变者平均发病年龄为44.67岁（30～65岁）,晚于APC突变者（29.11岁,9～47岁）和APC与MUTYH双基因突变者（29.5岁,24～36岁）,且P<0.05,有统计学意义。APC基因突变者发病年龄同APC和MUTYH双基因突变者相似,无统计学差异。35例APC基因突变者中,12例患者发生CRC,平均癌变年龄为34岁（12～47岁）。23例未发生CRC的APC基因突变者,平均诊断年龄为29岁（12～43岁）。结论:本研究发现了家族性腺瘤性息肉病患者APC基因和MUTYH基因新的突变位点。并且发现携带APC基因609密码子突变（c.18271831del）的患者存在严重表型:较早出现超过1000枚腺瘤性息肉及较早发生CRC。MUTYH基因突变者,杂合性及纯合性突变均可致病,且杂合突变者亦有发生CRC的风险。本研究发现家族性腺瘤性息肉病患者可同时存在APC和MUTYH双基因突变。双基因突变携带者的遗传模式符合常染色体显性遗传。我们建议对FAP患者应同时进行APC和MUTYH基因检测。第二部分家族性腺瘤性息肉病肠道菌群的研究背景:结直肠癌（CRC）的发生是由环境、饮食及生活方式与遗传因素协同作用而引起的一个多因素、多步骤的过程。越来越多的研究表明,散发性CRC患者存在肠道菌群失调,但目前关于与遗传性结直肠癌相关的微生物在很大程度上仍是未知的。FAP是第二常见的遗传性结直肠癌综合征,除了遗传因素,环境因素,特别是肠道菌群是否也参与了 FAP的发生及发展呢?目的:研究FAP患者肠道粘膜组织相关肠道菌群组成的特征,旨在找到某种可能在FAP发病过程中扮演重要角色的关键菌属。方法:收集健康人群、FAP患者、腺瘤患者和CRC患者结肠粘膜组织标本,提取粘膜组织DNA,通过illumina Miseq高通量测序平台对样本16S r RNA V4区进行测序,然后对测序数据进行生物信息学分析。结果:在门的水平,FAP患者的优势菌群同健康人群、腺瘤患者和CRC患者基本一致,主要为厚壁菌门、变形菌门和拟杆菌门。与健康人群相比,FAP患者拟杆菌门（29.11%vs 14.88%,P<0.05）、疣微球菌门（1.11%vs 0.18%,P<0.05）丰度明显增加。与CRC患者相比,FAP患者变形菌门（31.02%vs 18.71%,P<0.05）丰度增加,梭杆菌门丰度减少（14.52%vs 2.87%,P<0.05）。与腺瘤患者相比,FAP患者拟杆菌门丰度增加（29.11%vs 15.87%,P<0.05）。在属水平,同健康人群相比,FAP患者幽门螺杆菌属丰度增加（1.27%vs 0.25%,P<0.05）;与CRC患者相比,FAP患者幽门螺杆菌属（1.27%vs 0.02%,P<0.05）和乳酸菌属（1.09%vs 0.49%,P<0.05）丰度增加,而梭杆菌属（2.61%vs 14.48%,P<0.05）、普雷沃菌属（0.84%vs 7.65%,P<0.05）减少。与腺瘤组相比,FAP患者埃希氏杆菌/志贺氏杆菌属丰度降低（8.82%vs 22.56%,P<0.05）,幽门螺杆菌属（1.27%vs 0.06%,P<0.05）丰度增加。通过秩和检验的方法对不同分组之间进行显著性差异分析发现,在属水平上,幽门螺杆菌、乳酸菌属在FAP患者中富集,而红球菌属减少;梭杆菌属、消化链球菌属、普雷沃菌属和链球菌属在CRC患者中富集;埃希氏杆菌/志贺氏杆菌属、瘤胃球菌属在腺瘤患者中富集;罗氏菌属在健康人群中富集。FAP患者肠道内幽门螺杆菌属丰度无论是同健康人群相比,还是同腺瘤患者亦或是CRC患者相比均明显增高的,幽门螺杆菌可能与FAP的发生发展有关。结论:除遗传因素外FAP的发生可能还与肠道菌群有关。FAP患者结肠粘膜组织道菌群同健康人群、腺瘤患者和结直肠癌患者存在明显差异。幽门螺杆菌可能与FAP的发生有关。