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目的利用生长抑素(Somatostatin,SST)联合中药清胰汤合剂(Qing Yitang,QYT)干预肠道白色念珠菌感染的小鼠,观察肠道组织中HE染色、菌落计数、用Elisa法及免疫荧光检测肠道组织血D-乳酸及连接蛋白ZO-1,用流式细胞仪及蛋白质免疫印迹检测肠道组织凋亡细胞及ERK/MAPK信号蛋白的表达,对比采用单一及联合应用生长抑素和中药清胰汤合剂进行干预,研究探讨其对其肠粘膜屏障保护作用的可能机制。方法取健康SPF级(Specefic pathogen Free,无特定病原体)昆明雌性小鼠110只,体重18-20g,4周龄,采用随机分组方式抽取20只为空白对照组(C);80只用于建造肠道白色念珠菌感染造模组,分组后各组小鼠的体重无明显差异。两周后,从正常对照组及造模组中各随机抽取6只小鼠,取其肠道组织行CFU菌落及、HE染色并光学显微镜下观察,证实肠道感染白色念珠菌模型成功。将造模组剩余的63只小鼠(造模期间死亡11只)采用随机分组方式分成模型组及实验组(生长抑素组、清胰汤、联合用药组),分别进行药物干预治疗。药物等量持续干预7天,连续观察小鼠一般情况;干预治疗后及空白对照小鼠,采用颈椎脱臼法将其处死,无菌取出小鼠的回肠末端、回盲部及右半结肠部分的肠道组织进行HE镜下观、肠道内容物的白色念珠菌菌落计数、D-乳酸含量检测、ZO-1蛋白表达和分布免疫荧光检测、WB检测ERK/MAPK信号通路蛋白表达。所有实验数据均采用均数±标准差((x|-)±s)的方式表示,结合SPSS22.0统计软件进行分析。结果1小鼠一般情况观察对照组小鼠活泼好动、自由取食取水、体重增加、被毛柔顺且光泽;而模型组小鼠取食量和体重明显下降、被毛杂乱、反应灵敏度降低、精神不振、对捕捉的躲避食欲减退、懒动、嗜睡、消瘦。对模型组和对照组小鼠开腹进行观察,发现对照组小鼠肠道组织颜色红润、未见异常,肠蠕动正常;而模型组小鼠肠腔暗黑、管壁充血、未见明显肠蠕动。2白色念珠菌感染肠道模型小鼠HE染色情况模型构建完成后,对模型组和对照组小鼠肠道组织进行HE染色,结果显示对照组小鼠肠粘膜结构完好、未见炎性细胞和水肿、粘膜上皮结构正常、腺体排列规整、结构清晰及肌层无异常;而模型组肠粘膜结构破坏、浅表可见多个病灶、大部分腺体结构不完整、部分病灶表面上仅少许残留或完全被破坏。3白色念珠菌感染肠道模型小鼠菌落计数情况分别在模型构建完成后及实验结束后,开腹获取肠道组织,检测白色念珠菌菌落数(CFUs),结果表明,无论是模型建立后还是实验结束后,模型组小鼠肠道组织CFUs均显著高于对照组。4生长抑素和或清胰汤治疗对白色念珠菌肠道感染模型小鼠的疗效4.1 CFUs检测结果小鼠白色念珠菌肠道感染模型建立后,采用生长抑素和或清胰汤治疗,检测各组小鼠肠道组织CFUs,结果显示,模型组小鼠肠道组织CFUs显著高于正常对照组(p<0.05),而与模型组相比,生长抑素和或清胰汤治疗组CFUs均呈下降趋势,其中两种药物联合治疗组最显著(p<0.01)4.2血D-乳酸检测结果血中D乳酸水平可间接反映肠黏膜的损伤情况。五组小鼠血中D乳酸含量分别为0.082±0.021、10.14±0.813、4.099±1.016、5.128±1.020和2.672±0.743(ng/ml)。白色念珠菌感染建模后,D乳酸含量迅速升高,明显高于对照组(p<0.05),生长抑素和或清胰汤治疗,D乳酸含量开始下降,其中两种药物联合治疗组最显著(p<0.01)。4.3肠上皮紧密连接蛋白ZO-1的分布检测免疫荧光检测五组小鼠回肠末端黏膜紧密连接蛋白ZO-1分布情况后发现,对照组小鼠ZO-1蛋白呈完整环状分布、密度高、细胞间隔清楚可见;生长抑素和或清胰汤治疗后,ZO-1分布改善,形状改善、密度增加,其中生长抑素和清胰汤联合治疗组ZO-1蛋白分布改善最为明显.4.4凋亡检测结果流式细胞仪检测五组小鼠肠道粘膜组织发现,与对照相比,模型组小鼠肠道粘膜组织中细胞凋亡显著显著增加(p<0.05),与模型组相比,生长抑素和或清胰汤治疗后,凋亡率不同程度下降,其中联合治疗组下降最为明显(p<0.05),接近对照组。5生长抑素和或清胰汤治疗对白色念珠菌肠道感染模型肠道组织ERK/MAPK通路的影响Western blot各组小鼠ERK/MAPK通路p-ERK 1/2、MEK、Ras蛋白变化情况,结果显示模型组ERK/MAPK通路信号蛋白ERKl/2、p ERKl/2、MEK及Ras表达明显升高,生长抑素和或清胰汤治疗后,各蛋白表达呈不同程度下降,联合作用组下降最为明显,均有显著统计学差异结论1成功复制白色念珠菌肠道感染模型;2生长抑素与清胰汤联合应用能够减少小鼠肠道内白色念珠菌的定植数目,减少细胞凋亡和乳酸含量,增加ZO-1表达,对肠粘膜屏障起到一定的保护作用。3生长抑素与清胰汤合剂联合应用对肠粘膜屏障的保护作用可能与抑制ERK/MAPK信号通路有关。