尿道重建用静电纺丝素蛋白纤维毡的增强研究

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由多种原因引起的尿道缺损严重影响患者的生活质量。近年来,组织工程的兴起和迅猛发展为尿道修复开辟了新的治疗途径。尽管许多研究者尝试采用多种材料对尿道缺损进行修复,但仍存在生物相容性较差、降解速率过快、力学性能较低等问题。本论文以生物相容性优异的再生丝素蛋白(Regenerated Silk Fibroin,简称RSF)水溶液为原料,采用静电纺丝技术制备RSF组织工程支架(纤维毡),并对其进行后处理研究,改善其力学性能和降解性能,以满足短段尿道修复的使用要求。同时,为促进长段尿道修复用组织工程支架的快速血管化,采用共混静电纺丝和同轴静电纺丝技术成功制备了RSF-血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,简称VEGF)支架材料。采用荧光显微镜、扫描电子显微镜、透射电子显微镜、拉曼光谱、X射线衍射、差示扫描量热仪和电子万能试验机等研究了纤维毡的形貌、结构和性能。为制备满足尿道修复使用要求的支架材料,采用手工拉伸-乙醇水溶液浸泡的方法对纤维毡进行了后处理,研究了乙醇体积分数及浸泡时间对纤维毡结构和性能的影响。结果表明:乙醇水溶液可有效诱导RSF发生结构转变,提高p-折叠结构含量;乙醇体积分数和浸泡时间的增加均可提高纤维毡的力学性能;经手工拉伸后,在90 vo1%乙醇水溶液中浸泡30 min所得纤维毡的综合力学性能最佳。为有效控制RSF纤维毡的结构和性能,采用机械拉伸装置对拉伸速率和拉伸倍数进行精准的调控。拉伸倍数的增加和拉伸速率的降低不仅可提高纤维的排列取向度,而且可提高纤维毡的p-折叠含量、结晶度和力学性能。当拉伸速率为0.1 mm/s、拉伸倍数为1.4×时,单向拉伸所得纤维毡的断裂强度和断裂能分别为8.6MPa、172.2 J/kg,远高于初生纤维毡的1.1 MPa、41.5 J/kg。动物实验表明:该纤维毡可用于修复狗的短段尿道缺损。双向拉伸可制备各向力学性能均一且明显改善的静电纺RSF纤维毡。为开发制备各向力学性能均一的RSF纤维毡的新方法,对湿处理的可行性进行了研究。结果表明:湿处理同样可促进RSF分子由无规卷曲/31-螺旋向p-折叠结构转变,且湿处理时间和湿处理温度对纤维毡结构和性能的影响符合时温等效原理。通过对两者调节可制备性能各异、满足不同使用要求的支架材料。当湿处理温度为65℃、湿处理时间为12 h时,纤维毡的断裂强度和断裂能分别为6.0 MPa和171.7 J/kg。为促进长段尿道修复用组织工程支架的快速血管化,采用共混静电纺丝和同轴静电纺丝技术成功制备了RSF-VEGF支架材料,有效解决了VEGF的负载问题,有望实现VEGF在尿道内的可控缓释。
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