随着海水养殖产业的发展,细菌性疾病在海水养殖物种中普遍发生,而化学药物、抗生素的使用又存在许多的安全问题,因此寻找对海水病原菌具有抗性的拮抗菌株便成为越来越多学者的研究焦点。本试验在前期的研究基础上,筛选出对迟缓爱德华氏菌、哈维氏弧菌、无乳链球菌分别具有较好抑制作用的菌株作为拮抗菌。通过验证理化因素对拮抗菌抑菌物质的影响分析其产生的抑菌活性的方式,进一步使用HPLC、ESI-Q-TOF纯化鉴定菌株BA09的抑菌物质。通过将BA09添加到饲料中投喂给大菱鲆,确认其在防治迟缓爱德华氏菌感染时对大菱鲆生长、免疫等指标的影响。以期为BA09在水产养殖中的潜在应用提供有益参考。具体研究内容如下:（1）BA09的鉴定与抑菌活性分析选取17株益生菌作为备选菌株,以迟缓爱德华氏菌、哈维氏弧菌、无乳链球菌作为指示菌。使用点种法和打孔法筛选出了菌株BA09,其代谢产物对三种海水病原菌的拮抗作用均好于其他备选菌株,经鉴定为蜡样芽孢杆菌。BA09的代谢产物在受到不同理化因素处理后,对三株病原菌的拮抗作用没有发生改变,表明其对理化因素不敏感。综合试验结果与时间成本,选择36 h作为发酵时长、-80℃储存样品。（2）BA09代谢产物的分离与鉴定去菌体发酵液冻干经甲醇提取后,打孔法试验显示抑菌活性物质极性较大、全部溶于甲醇,透析袋除盐后仍保留抑菌活性。使用反相色谱柱洗脱样品后共收集到27组馏分,检验发现对迟缓爱德华氏菌存在抑菌活性的馏分为F19、F20、F21,而对哈维氏弧菌和无乳链球菌存在抑菌活性的馏分均为F16、F17、F19、F20、F21、F26。质谱共检测出Bacillomycin、Fengycin、Surfactin三种脂肽类物质。（3）BA09对迟缓爱德华氏菌的生防应用研究通过注射、浸泡两种攻毒方式进行安全性试验,结果表明在增重、特定生长率、肥满度等方面与对照组无显著性差异,均不产生影响,BA09对大菱鲆无明显不良影响,对大菱鲆是安全的。在大菱鲆攻毒病原菌前后持续投喂喷洒有菌株BA09的饲料,保护性试验表明,投喂带BA09的饲料对大菱鲆的各生长指标以及免疫酶活性无显著差异。在饲养过程中全程投喂菌株BA09能够减少大菱鲆受迟缓爱德华氏菌感染而死亡。综上,本试验筛选出了一株能够抑制三种海水病原菌的蜡样芽孢杆菌,并研究了其胞外抑菌物质的抑菌活性。通过对菌株BA09的胞外抑菌物质的纯化与鉴定,结果表明抑菌物质为Bacillomycin、Fengycin、Surfactin三种脂肽类物质。动物试验表明,在饲养过程中全程投喂菌株BA09能够减少大菱鲆受迟缓爱德华氏菌感染而死亡。