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球虫病是集约化的养鸡场危害最大的疫病之一，目前其防治仍不能离开抗球虫药，但药物使用过程中不可避免的会产生抗药性，因此，我们选择抗药性这个球虫病防治中的重要课题进行研究，采用玻璃纸法进行了柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的单卵囊感染和单孢子囊克隆，采用过滤、离心分离和DE-52纤维素柱层析系列方法纯化了不同虫株球虫的裂殖子，对不同虫株的裂殖子进行了mRNA差异显示，进行了实验室球虫抗药性分子检测方法的初步应用。 单卵囊纯化和单孢子囊克隆。用单卵囊感染技术，对柔嫩艾美耳球虫卵囊进行了分离纯化，实验室单卵囊感染26只鸡，饱和盐水漂浮集卵法进行检测，成功率达38％；首次采用单孢子囊克隆技术，在国内对柔嫩艾美耳球虫进行了克隆，单孢子囊感染35只鸡，10只鸡感染成功，成功率28.6％。结果获得了遗传上单一的上海马杜霉素敏感和抗药虫株，甘肃地克珠利敏感和抗药的虫株，该单卵囊分离纯化和单孢子囊克隆技术简单易行。 不同虫株的裂殖子的分离纯化。12日龄的肉用雏鸡，感染1.5×10~5个卵囊，采用标准分样筛过滤、离心分离和DEAE-52纤维素柱层析，纯化了2个敏感虫株和2个抗药虫株裂殖子，通过比较，选定离心管加样三分之二高度，600rpm离心8分钟，填充高度为14cm的层析柱分离纯化，从30只鸡盲肠黏膜中纯化裂殖子1.85×10~1个，平均每只鸡获得裂殖子6.17×10~5个，其中杂质极少，其纯度适用于mRNA差异显示等分子生物学研究，分别分离纯化了柔嫩艾美耳球虫马杜霉素敏感虫株和抗药虫株5×10~8个裂殖子。 柔嫩艾美耳球虫敏感虫株和抗药虫株的mRNA差异显示。采用锚定引物和随机引物，首次对马杜霉素敏感虫株和马杜霉素抗药虫株进行差异显示PCR，共回收34条差异片段，反向Northern点杂交鉴定4个片段为阳性，对阳性克隆测序、同源性比较。来自于马杜霉素抗药虫株裂殖子的ACD3-2序列与柔嫩艾美耳球虫微线-5同源性达99％，说明ACD3-2序列是该基因的部分序列，微线-5蛋白与虫体融解宿主细胞膜、入侵、运动和溢出有关，在第二代裂殖子时期，抗药性虫株该序列发生转录，而在敏感虫株中沉默。HCD1序列来自马杜霉素敏感虫株，该片段与柔嫩艾美耳球虫表面抗原16和17序列同源性分别为83％和86％，没有该表面抗原功能的报道。AGD5片段来自抗药虫株，HAD8-2序列来自敏感虫株。通过比较认定这两条序列为新序列，它们所代表的基因的意义尚不清楚。 实验室球虫抗药性分子检测的初步研究。选择在敏感虫株中沉默，抗药虫株中表达的特异序列AGD5设计检测引物，采用RT-PCR方法，以总RNA反转录的cDNA为模板，RT-PCR方法能够鉴别马杜霉素抗药虫株和3株马杜霉素敏感虫株(2株对所有药物敏感的不同地理株，1株地克珠利抗药性虫株)；此鉴定结果与鸡体试验的结果一致。说明敏感虫株和抗药虫株的在该序列的差异发生在转录水平。以卵囊的总DNA为模板PCR方法却不能鉴别敏感和马杜霉素抗药性虫株。