槐杞黄联合孟鲁司特钠干预对哮喘大鼠气道炎症及LTD4、IL-17表达的影响

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目的观察槐杞黄颗粒和孟鲁特钠(montelukast, MK)十预哮喘模型大鼠对气道炎症、气道重塑以及白三烯D4(leukotriene D4, LTD4)和白介素17A(Interleukin-17A,简称IL-17)表达的影响;探讨槐杞黄辅助孟鲁司特钠治疗哮喘的作用机制。方法1.取4-6周龄雄性SD大鼠(体重120±10g)40只,随机分为5组:对照组(Control)、模型组(Model)、孟鲁司特钠组(MK)、槐杞黄组(H)、.孟鲁司特钠+槐杞黄组(MK+H),每组8只。2.除对照组外,其他各组分别于第1天、第8天腹腔注射0.1%卵清蛋白(ovalbumin, OVA)混合液1 m1(含OVA1mg、氢氧化铝100mg及灭活百日咳杆菌苗5×109个作为免疫佐剂)致敏,第15天开始以1%OVA雾化液8m1隔日1次雾化激发,20分钟/次,连续激发4周建立哮喘模型。对照组致敏激发均以生理盐水代替。从第15天开始各干预组每天分别予以孟鲁司特钠(1mg/100g/d)、槐杞黄(0.4g/100g/d)、孟鲁司特钠(1mg/100g/d)+槐杞黄(0.4g/100g/d)灌胃处理。3.各组大鼠于末次激发后24小时处死,取血浆、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluids. BALF)及右肺上叶组织。右肺上叶组织制作石蜡切片,行HE染色、Masson染色和AB-PAS染色行病理学检查,分析气道炎症和气道重塑情况;免疫组化方法测定肺组织IL-17表达;计数BALF细胞总数和细胞分类;ELISA方法测定血浆及BALF上清液中LTD4和IL-17的浓度结果1.临床表现:与对照组相比,在激发过程中,模型组大鼠逐渐出现烦燥不安、挠鼻、呼吸急促、呈点状呼吸、发绀、活动进食减少或俯卧不动、出现竖毛、毛发失去光泽甚至脱毛、反应不敏捷等哮喘样表现。其它干预组大鼠症状较模型组不同程度减轻,以孟鲁司特钠组及孟鲁司特钠+槐杞黄组改善明显。2.气道病理学改变:1)支气管周围炎性细胞浸润程度:模型组支气管周围炎性细胞浸润程度较对照组明显加重(P<0.05),与模型组比较,各干预组支气管周围炎性细胞浸润程度按H组、MK组、MK+H组顺序依次减轻(P<0.05)。2)杯状细胞占上皮细胞百分比:模型组杯状细胞占上皮细胞百分比较对照组明显升高(P<0.05);各干预组均较模型组明显降低(P<0.05);MK组、MK+H组之间比较无显著性差异,均较H组明显降低(P<0.05)。3)胶原沉积面积:模型组胶原沉积面积较对照组明显增加(P<0.05);MK组、MK+H组之间比较无显著性差异,均较模型组明显降低(P<0.05);H组与模型组比较无显著性差异。4)平滑肌增生面积:模型组平滑肌增生面积较对照组明显增加(P<0.05);各干预组较模型组明显减少(P<0.05):MK+H组减轻最明显(P<0.05);MK组与(?)组比较无统计学差异。5)免疫组化:模型组IL-17蛋白表达量较对照组明显升高(P<0.05);各干预组IL-17蛋白表达量按H组、MK组、MK+H组顺序较模型组依次下降(P<0.05)。3.BALF细胞总数和细胞分类计数:与对照组比较,模型组BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞(eosinophils, EOS)及中性粒细胞(neutrophils,NEU)占细胞总数百分比均明显升高(P<0.05);与模型组比较,各干预组BALF中细胞总数、EOS及NEU占细胞总数百分比按H组、MK组、MK+H组顺序依次下降,但H组中性粒细胞占细胞总数百分比与模型组比较差异无统计学意义;与MK组比较,MK+H组EOS及NEU占细胞总数百分比下降无统计学意义。4.血浆和BALF LTD4、IL-17浓度:1)血浆和BALF中LTD4浓度:模型组血浆和BALF中LTD4浓度均高于正常对照组(P<0.05);与模型组比较,各干预组血浆和BALF中LTD4浓度按H组、MK组、MK+H组顺序依次下降,但MK+H组与MK组之间比较无显著差异,H组血浆LTD4浓度与模型组比较差异无统计学意义。2)血浆和BALF中IL-17浓度:模型组血浆和BALF中IL-17浓度均高于正常对照组(P<0.05);与模型组比较,各干预组血浆和BALF中IL-17浓度按H组、MK组、MK+H组顺序依次下降,但H组与模型组比较下降无统计学意义。5.血浆与BALF中IL-17浓度及肺组织IL-17表达量呈正相关(P<0.05);肺组织IL-17表达量与BALF中EOS占细胞总数百分比及NEU占细胞总数百分比呈正相关(P<0.05)。结论1.哮喘大鼠血浆及BALF中LTD4浓度明显增高。2.哮喘大鼠血浆及BALF中IL-17浓度明显增高,在小支气管柱状上皮及炎症细胞上IL-17蛋白表达量明显增高。3.血浆IL-17浓度与BALF中IL-17浓度及肺组织IL-17蛋白表达量呈良好的相关性与一致性,提示血液检测IL-17可以简便准确地反映气道IL-17水平。4.孟鲁司特钠能降低哮喘大鼠血浆及BALF中LTD4、IL-17浓度,下调肺组织IL-17蛋白的表达量,抑制气道炎症,减缓气道重塑;与槐杞黄颗粒联合干预后能进一步改善上述指标,其抗炎作用可能是通过下调LTD4、IL-17来实现。
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