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第一部分尿毒症患者肠道细菌肌酐酶的研究
目的：研究尿毒症患者肠道细菌对肌酐的分解作用，肠道细菌肌酐酶的分离纯化，肌酐酶的基因鉴定及其氨基酸序列。
方法：对尿毒症患者和正常人的肠道细菌进行了培养，生化鉴定，16s核糖体的DNA鉴定，引入Tetrazoliumviolet(四唑紫)进行细菌分解肌酐的定性试验，也进行了定量分析。对肠道细菌进行诱导产生肌酐酶，经真空冷冻干燥、热处理、硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤等分离纯化肌酐酶，设计引物经PCR扩增肌酐酶基因，根据基因推定其氨基酸序列。
结果：一1.培养鉴定了尿毒症患者的8种肠道细菌(大肠埃希菌、粪肠球菌、阴沟杆菌、普通变形杆菌、弗劳地枸缘酸杆菌、肺炎克雷伯菌、福氏志贺菌、溶解肠杆菌)。
2.尿毒症患者及正常人的肠道细菌均可以分解肌酐，前者的能力强。
3.分离纯化了尿毒症患者肠道细菌分泌的肌酐酶，分子量28.4KD。
4.克隆出了编码肌酐酶的基因。
5.推定出了组成肌酐酶的氨基酸序列。
结论：尿毒症患者肠道细菌是通过分泌肌酐酶来分解肌酐的，其分解肌酐的能力可以被高浓度的肌酐所诱导。
第二部分肌酐产物对红细胞的影响目的：研究肌酐产物对红细胞的毒性作用
方法：用液相色谱仪分析尿毒症患者肠道细菌分解肌酐的产物。用分解肌酐能力最强的肺炎克雷伯菌与肌酐共同培养，取其培养液与健康红细胞孵化，观察溶血情况；并分别加入葡萄糖、ATP(三磷酸腺苷)、GSH(谷胱甘肽)，了解以上物质对溶血的纠正情况；并测定红细胞内GSH的浓度。
结果：肠道细菌分解肌酐产生甲胺。肌酐组溶血度1.52％，肌酐产物组3.52％，后者较前者的毒性强，加重红细胞溶血(P＜0.05)：加入葡萄糖、ATP溶血不纠正，加入GSH明显纠正(P＜0.001)：GSH组溶血度0.252％，正常对照组0.192％，二者差异无显著性。肌酐组红细胞内GSH含量2152.98μmol/L，肌酐产物组1047.96μmol/L，后者红细胞内GSH含量明显降低(P＜0.001)。
结论：肌酐产物导致红细胞溶血，红细胞内GSH含量下降，补充GSH可纠正溶血。
第三部分肌酐产物对肾小管上皮细胞的影响目的：研究肌酐产物对肾小管上皮细胞的毒性方法：1.原代培养肾小管上皮细胞
2.肌酐产物与肾小管上皮细胞共同培养，用MTT(四甲基偶氮多胍)渗入法观察其增殖抑制情况；并分别加入葡萄糖、ATP、GSH，了解以上物质对增殖抑制的纠正情况；对肾小管上皮细胞进行形态学观察；抽提DNA进行琼脂糖电泳观察有无梯形条带。
结果：1.肌酐组OD值0.231，肌酐产物组0.183，肌酐产物抑制肾小管上皮细胞增殖(P＜0.01)；加入葡萄糖、ATP不纠正，加入GSH纠正(P＜0.01)；GSH组OD值0.261，正常对照组0.254，二者差异无一显著性。
2.肾小管上皮细胞在肌酐产物作用下逐渐变小、变圆、固缩，最后漂浮死亡，但胞膜始终完整。
3.肌酐产物导致肾小管上皮细胞凋亡，琼脂糖凝胶中有DNA梯形条带，加入GSH未见DNA梯形条带。
结论：肌酐产物抑制肾小管上皮增殖，促进其凋亡，GSH可阻断之。