论文部分内容阅读
共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)是一种18碳不饱和脂肪酸,具有抗氧化,抗癌,增强机体免疫和减少体脂肪含量等特殊的生物活性。天然CLA是由亚油酸经微生物氢化而生成。人类食物中的CLA主要来源于反刍动物奶肉品。为了提高反刍动物奶肉品中CLA含量,人们多在日粮中外源添加化工合成的CLA,利用微生物发酵方法提高日粮中CLA含量的研究却尚未见报道。为此,本试验就对青贮中CLA的含量进行检测,筛选并鉴定出CLA生产菌株并对其生产工艺进行优化,再将高产菌返接回青贮中进行生物发酵调控,确定其最佳接种量和油脂添加比例。试验以玉米青贮为原料,利用紫外分光光度计法测定玉米青贮饲料中CLA含量。结果显示,青贮饲料中CLA含量大约为2～4μg/g,提示青贮饲料中存有亚油酸氢化微生物,乳酸菌可能是最主要的亚油酸氢化微生物。从玉米青贮中分离到一株CLA生产菌(编号:ANCLA01),发酵液中CLA生成量为33.442μg/mL;菌株为革兰氏染色阳性杆菌且菌体短直、两端钝圆,不产芽孢;发酵时有乳酸生成,属于同型发酵B型并对底物要求特殊的乳酸杆菌;分子生物学鉴定结果表明该菌株与Lactobacillus plantarum strain L5的16S rRNA碱基序列相似性达99.93%,兼顾该菌株传统鉴定方法鉴定结果,确定其为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)。结果表明:ANCLA01菌株是青贮玉米中产CLA的植物乳杆菌。对植物乳杆菌ANCLA01转化生产CLA的工艺条件进行了优化,其优化的工艺条件为:亚油酸与发酵液的最适体积比例为0.075%,反应温度35℃,培养时28h,初始pH值7.0,在优化工艺条件下,每毫升发酵液中CLA含量可达290μg。同时,微氧条件可提高CLA的产量。研究了植物乳杆菌ANCLA01接种量和葵花籽油添加比例对红薯块根青贮、土豆青贮、胡萝卜青贮和白萝卜青贮中CLA含量的影响。结果表明:植物乳杆菌ANCLA01接种量和葵花籽油添加比例对四种青贮中CLA生成量均有极显著影响(P＜0.001);在同水平下增大ANCLA01菌接种量及在同水平下增加葵花籽油质量比,四种青贮中CLA生成量均呈先增加后减少趋势;当菌株ANCLA01接种量为6×10~7cfu/g,油脂添加比例在0.009-0.012g/g范围时,四种青贮中生成的CLA量均达到最大,其中土豆青贮中CLA生成量最高,达9.246μg/g。证实选育后的植物乳杆菌ANCLA01返接青贮后依然具有转化生产CLA能力。